利用安捷伦SampliQ SCX 固相萃取柱和液相色谱/串联质谱联用检测猪肉中的β2-激动剂

利用安捷伦SampliQ SCX 固相萃取柱和液相色谱/串联质谱联用检测猪肉中的β2-激动剂

应用报告/食品安全

作者: Chenhao Zhai 安捷伦科技有限公司
中国上海外高桥保税区，英伦路412 号 上海，200131 中国

Jianzhong Li and Yue Song 安捷伦科技有限公司
福州路318 号, 高腾大厦11 楼 上海200001 中国

摘要
本应用报告开发并验证了一种同时检测四种β2-激动剂残留物的方法，包括特布他林、 沙丁胺醇、克仑特罗和福莫特罗。分析物经过液-液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)纯化后， 由正离子多反应监测模式下的液相色谱耦合电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)进行定量。

该方法为检测猪肉中四种β2-激动剂提供了亚ng/g 水平的检测限（LOD），以及0.25 至5 ng/g 的动态校准范围。总回收率为78%至101%, 相对标准偏差(RSD)为1.8%至7.2%。

前言
β2-激动剂是广泛应用于猪肉生产中的一种非法生长促进剂。最近发生的中毒事件都是因为猪肉中含有高水平的β-激动剂（克仑特罗）。本应用报告采用了安捷伦公司新推出的固相萃取（SPE）产品来提取和浓缩猪肉中的β-激动剂，并采用LC-MS/MS 进行分析。表1 给出了四种β-激动剂化合物的名称和结构。

表1. 本研究中采用的β2-激动剂化合物

实验
试剂及药品
所有试剂都是质谱纯级、高效液相纯级或分析纯级。

乙腈和水由Scharlau 公司提供。乙酸乙酯、异丙醇由Fisher 公司提供。标准物均采购自国家药品生物制品检定所（NICPBP）。 猪肉则由本地市场采购。 以甲醇配制单个标准溶液（1.0 mg/mL），并在4 °C 下冷藏。

以甲醇-水(10:90) 配制合并工作溶液（10 μg/mL），并在4 °C 下冷藏。添加溶液应每周配制, 以适当稀释合并工作溶液来制备。

设备与材料
安捷伦1200 高效液相色谱系统
安捷伦6460 三重四极杆液相色谱-质谱/质谱联用系统
安捷伦SamliQ SCX 聚合物柱，50×3 mL 管，60 mg（部件号：5982-3236）
安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18 色谱柱，50 × 2.1 mm, 1.8 μm (部件号: 959741-906)
安捷伦真空歧管处理盒(部件号: 5982-9120)

样品制备
液-液提取
于15mL 带盖聚丙烯管中称取2 g 猪肉（精确至±0.01 g）。加入 8 mL 0.2M 的乙酸钠（pH 值5.2）溶液，并涡旋以混合均匀。然后加入100 μL β-葡萄糖醛酸酶（1000 U/mL）并涡旋混合2 分钟。样品在37 °C 下水解16 小时。

水解产物经震动处理15 分钟后，在离心机中用4000rpm 的速度离心分离10 分钟。取4 mL 上层清液至另一离心管中，加入5 mL
0.1M 高氯酸溶液并调节pH 值至1 ± 0.3，再在离心机中以 4000 rpm 的速度离心分离10 分钟。将上层清液移至另一试管中，用10M 氢氧化钠溶液调节其pH 值至11。

于样品试管中分别添加10 mL 饱和氯化钠溶液和异丙醇-乙酸乙酯（60:40）混合液，并震动处理5 分钟。以4000 rpm 离心分离5 分钟后, 将有机层仔细转移至另一离心管中。将异丙醇-乙酸乙酯混合液的添加、震动处理、离心分离和转移有机液层的过程重复两次，并将所有上清液合并。

样品于40 °C 以氮气吹干，并将残留物复溶于5 mL 0.2M 的乙酸钠（pH 值5.2）溶液中。该样品将用于固相萃取纯化。