微载体用量为3 g/l的 Cytodex3，接种细胞密度为0.3×106细胞/ml。培养条件为37℃，pH 7.3，5% CO2，采用光纤溶氧电极监测溶氧水平。培养基含有 2%  FBS。每小时取样并用结晶紫染色测定总细胞密度，上清中的悬浮细胞和死细胞用台盼蓝染色。MDCK细胞在接种后1 h开始贴附到微载体表面（图 7A）。培养3 h后，85%的接种细胞贴附（图7B）。18 h后，细胞在微载体表面铺展并开始生长（图7C）。

图7.MDCK细胞贴附到微载体的显微照片。培养3 h后，85%的接种细胞贴壁（7B）。18 h后，细胞铺展并开始生长（7C）。 

    尽管连续混合能够使细胞在微载体上产生更均一的分布，但间歇式、半间歇和连续摇动混合步骤之间没有观察到细胞贴壁和生长的任何显著性差别（图8、9 和10）。在 2% FBS的低血清条件下，不同的混合步骤表现出类似的结果， 且MDCK细胞的贴壁条件具有很好的耐用性。

图 8.间歇式混合方式的 MDCK细胞微载体贴壁情况

图 9. 半间歇混合方式的 MDCK细胞微载体贴壁情况

图 10. 连续混合方式的 MDCK细胞微载体贴壁情况

    Vero细胞贴附微载体

    我们使用不同的摇动方案和培养基组成研究Vero细胞对Cytodex 3 微载体的贴附。在Cellbag-2L中以600 ml的工作体积进行细胞培养。连续摇动参数被设置为12 rpm和5.5º；以16 rpm和5º间歇摇动2 min；然后设置为0 rpm和0º停止摇动18 min。在6 h 后，上述所有的摇动方式都转为12 rpm和18º的连续摇动模式。图11显示在含血清条件下，连续或间歇摇动混合期间可获得大约90%的细胞贴附。在无血清条件下，间歇式混合方式获得80%贴附，而连续混合获得30%贴附。

图 11.无血清（sf）和含血清（s）培养基对 Vero 细胞贴附到 Cytodex 3微载体的影响。在贴壁阶段，分别采用连续摇动(cont)和间歇摇动(int)的混合方式。接种后24 h 的细胞在微载体上的贴壁情况如图所示。