正常大鼠小胶质细胞的培养

实验材料：
1. 新生大鼠或小鼠；
2. 不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；
3. 培养用液：含10%的胎牛血清的MEM培养液，补加5μg/ml牛胰岛素、2%葡萄糖及抗生素；
4. CFS-Ⅰ刺激因子：小胶质细胞在体外培养条件下一般不分裂，加入星形胶质细胞所产生的活性物质或单核巨噬细胞系体外存活、增值和分化特异的某些生长因子如CFS后可在体外增值；
5. 培养器具：眼科剪、眼科镊等；

实验方法：
1. 切取新生大鼠大脑皮质等灰质组织，经剪碎、胰蛋白酶消化，制成分离的细胞悬液，培养瓶中进行原代培养两周左右。制备混合的胶质细胞原代培养物；
2. 37℃恒温摇床上以150r/min摇动处理胶质细胞原代培养物2h；
3. 收集培养瓶中摇晃下来的细胞悬液，将其种植到未用生长基质成分包被的塑料培养皿内进行短期培养；
4. 弃去未贴壁的漂浮细胞及悬液。已在培养皿上贴壁的细胞即为小胶质细胞；
5. 将所获得的小胶质细胞调制成细胞密度为2×105个/ml的细胞悬液；
6. 将细胞悬液种植到培养瓶、皿内，继续培养。届时在培养液中加入10%粗制CFS或者25U/ml的纯CFS。一周换液两次。