标准添加法
当无法获得空白试样时，婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的定量分析将通过标准添加法进行， ( 烟酰胺除外 )* 。在试样中添加已知浓度 ( 标准溶液 ) 的分析溶液，使任何基质效应都可在校准时消除。分析员最初并未知道试样中分析物的含量，但可对加入的标准溶液的含量以及加入标准溶液后仪器响应的变化进行追踪。因此，通过校准曲线外推法可测定试样中分析物的浓度。实践中，标准溶液的添加体积需保持在少量水平，以避免样品基质的稀释。

* 试样基质使用现有稀释系数 ( 见实验步骤 ) ，无标准品添加，仪器对婴幼儿配方奶粉中烟酰胺 (B3) 的响应接近检测器饱和值。如果标准添加法用于烟酰胺，将使检测器达到饱和。

试样准备、萃取和标准添加
按婴幼儿配方奶粉包装说明上的三倍浓度进行制备。

将 10 毫升婴幼儿配方奶粉溶液放入用箔覆盖的聚丙烯 (PP) 管中；加入 20 毫升 100% 浓度的乙醇。

摇晃混匀 2 分钟，以 3500 RPM 的速率离心 15 分钟。

上清液用 0.45μmPVDF 滤膜过滤。

将 20μL 上清液转移至样品瓶，加入 10μL 含 11 种分析物的已知标准浓度溶液，样品瓶加水至 1 毫升 ( 将试样基体中的分析物稀释 50 倍；标准溶液中的分析物最终稀释 100 倍 ) 。

溶液中烟酰胺标准曲线单独制备。

通过 LC/MS/MS 进行分析。

采集和数据处理方法
通过 MassLynx 软件 v.4.1 版本获取数据，使用 TargetLynx 应用管理软件进行数据处理。
使用 IntelliStart 技术对 12 种目标维生素进行自动 MRM 采集方法优化。 IntelliStart 只需输入复合物的基本信息，即可自动找到母离子，优化锥孔电压，找到子离子并优化碰撞能量。

每种维生素的 2 个 MRM 通道均已得到优化；第一个通道为定量离子通道，第二个通道为定性离子通道。通道的驻留时间自动得到优化，每个色谱峰最少有 12 点以保证定量重现性。分析物的 MRM 通道、锥孔电压、碰撞能量、以及保留时间详见下表 1 。

表 1. 检测水溶性维生素的 LC/MS/MS 参数

除 MRM 数据外，使用 Xevo TQ MS 的 RADAR 模式可获得全扫描数据。 RADAR 是一种可获得丰富信息的采集方法，获取 MRM 数据的同时可实时获取试样基质的背景质谱信息。使用 RADAR 不会影响 MRM 数据的质量。

结果与讨论
ACQUITY UPLC 系统结合 Xevo TQ MS 的 ESI 正离子模式成功分析了 12 种水溶性维生素。使用 ACQUITY UPLC 可在 5 分钟内快速分离所有分析物，包括 1 分钟平衡时间，详见图 1 。

在同一分析检测中，使用 Xevo TQ MS 的 RADAR 模式监测婴幼儿配方奶粉基质中化合物的全扫描质谱信息。 RADAR 利用 Xevo TQ MS 的快速采集速率获取全扫描 MS 数据，且同时在 MRM 模式下得到足够的分析物峰点数，以准确定量和定性。

通过 RADAR 可观察试样基质中的杂质，并了解可能造成基质效应的化合物含量和类别。这对 LC-MS/MS 方法开发过程中优化方法以降低基质影响带来帮助。例如，可通过调整分离方法使得目标峰与可能引起基质影响或离子抑制的区域分离。图 1 中插入部分为从婴幼儿配方奶粉试样基质全扫描数据中提取的质谱图。

此方法检测了两种不同大众品牌的婴幼儿配方奶粉。图 2 显示的是从其中一种品牌里提取的水溶性维生素定量离子色谱图。