用UPLC/MS/MS和UPLC/PDA 进行三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸分析

Mark E. Benvenuti 和 Aisling O’Connor
沃特世公司，美国马萨诸塞州米尔福德

引言

北美地区最近出现的宠物食品污染事件突出了对宠物食品、动物饲料以及组织样品中的三聚氰胺及其代谢物（三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸）进行快速、确定性分析的必要性。如 2007 年 5 月 7 日 的《华盛顿邮报》所述，在美国，未知数量的猫狗因食用了某些品牌的宠物食品而患病或死亡。这导致了数百万磅宠物食品的召回。在食用了受污染宠物食品的动物肾脏内，发现三聚氰胺 - 三聚氰酸的结晶体迅速形成；这很可能是动物患病甚至死亡的原因。最近，公众强烈要求制造商和政府监管机构采用更准确、快速的分析方法进行食品安全性检测；而此次疾病的突发使这一呼声更加高涨。

在证实了此次污染的广泛性之后，美国食品药品管理局（ FDA ）报告称美国的三聚氰胺存在于面筋和稻米蛋白浓缩物中；这些产品均从中国进口，作为宠物食品使用 1 。动物饲料中也受到了三聚氰胺的污染 2 ，这引起了关于受污染产品可能转移至人类食品供应的担忧。

本文介绍两种方法：第一种方法是用于分析高浓度目标物质的沃特世 ® ACQUITY ® 超高效液相色谱（ UPLC ® ）光电二极管阵列法（ PDA ）；第二种方法是用于分析 ppb 级浓度的 ACQUITY UPLC ® /MS/MS 法。撰写本文时，其中的一种目标物质“三聚氰酸一酰胺”在市面上买不到；因此，未用上述方法对其进行分析。目前认为该化合物与毒性效应无关，因此对分析过程不重要。两种方法均可用不到两分钟的时间给出结果。

结果和讨论

在含水混合液中，三聚氰胺和三聚氰酸可通过氢键形成晶格结构。这阻碍了对包含这两种化合物的样品进行同步萃取和分析。三聚氰胺不与三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸一酰胺反应；因此可在一次检测中，同时对这些化合物进行萃取和分析。结果表明：试验部分所述的萃取步骤适用于三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺。最近，美国食品药品管理局公布了使用 SPE 萃取组织样品中的三聚氰酸的详细方法 3 。

试验

萃取宠物食品中的三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的预备程序

称量 0.10 -1 g 宠物食品
在 5-10 mL 、 2% 的氢氧化铵溶液中进行萃取
用一个 0.45 微米的注射器式滤器进行过滤
将 100 μL 滤液与 900 μL 流动相混合后进样

三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸由美国 TCI 公司提供。干狗粮从当地的一家超市中购得。三聚氰酸的标准储备液通过加水溶解而制得。三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的标准储备液通过溶解于 0.1% 的氢氧化钠水溶液而制得。标准储备液用溶于 90/10 乙腈／水的混合溶剂中 10 mM 醋酸铵进行进一步的稀释，以配制出所需的浓度水平。