例（3）用CsCl 梯度分离DNA 并测定其组成（% G+C）
（i）CsCl 溶液密度D 与溶液中CsCl 的重量百分比浓度P 之间的关系： D=138.11/（137.48-P）
（ii） 制备初密度为1.706 克/毫升的梯度液，应按以下要求配置
·4.85 克CsCl （分析纯）
·50μl ，1.0M Tris-HCl（PH7.4）
·20μl， 0.2M EDTA（PH7.4）
·0.5ml DNA 样品
·3.3ml 重蒸水
（iii） 用光折射仪检测CsCl 的初始密度D，设测得的光折射率为RI，则有 D=10.8601×RI-13.4974
（iv） 测得的RI 应为1.4000，如果检测值大于此值，再加重蒸水容量为V（毫升），梯度液的总容量为G（毫升） V=1.52×G×（D 测定-D 需要） 如果检测值小于1.4000，那么再加固态CsCl（W）克W=1.32×G×（D 需要-D 测定）
（v） 再测溶液折射率直至调整RI=1.4000
（vi） 将配置好的液体充满于5ml 的一次性快速密封离心管，并利用封口机密封。
（vii） 固定角式转头150,000xg ， 20 ℃离心50~55 小时（约35,000rpm）或垂直管转头300,000xg，20℃离心12 小时（约55,000rpm ）
（viii） 离心后利用梯度仪或手工收集成50 管（每管100μl）。
（ix） 对每管样品测定折射率至小数4 位，测试过程中应保持样品温度为20℃，根据折射率RI 计算各管样品的密度D。
（x） 每管中加1 毫升重蒸水，在260nm 波长时分别测各管光密度（OD），如果DNA 已做了同位素标记，那么还要对收集的样品分别做液体闪烁计数仪测定辐射值。
（xi） 以离心管容量为横坐标（从管底至管面），分别以各管测得的OD 值或同位素放射计数值为纵坐标作曲线。找到曲线的峰值位置即可做DNA 定位。
（xii） 用下式计算DNA 组成：
%（G+C）=（D-1.66）/0.098×100 如果能在离心样品中加入标准DNA，计算就更加准确。
说明：
·进入90 年年代以后用DNA 测序法或在260nm 波长加温溶点法进行测定比离心法更简单，究竟用什么方法要由使用单位现有设备来决定。
·在不用E.B.（溴乙锭）的情况下，用CsCl 梯度分离DNA 一般不会影响DNA 的构型。
·某些梯度材料如Cs2SO4 在离心过程中形成的密度梯度太陡而不适合做质粒DNA 离心。
·某些非电离性的梯度材料（如Nycodenz ）也不适用于此类离心。
例（4）用CsCl 梯度纯化RNA ·配置溶液： I：7.5M 氯胍，50mM 醋酸纳（PH7.0） 0.1M 2-巯基乙醇，0.5% Sarkosyl 。
II：10mMTris-HCl（PH7.4），2Mm EDTA 。
·实验步骤:
(i) 在溶液I 中制备细胞匀浆,每克细胞加入10ml I 溶液. (ii) 匀浆离心, 8,000rpm(约8,000xg),5℃,10 分钟,固定角式转头,PA 或PP 离心管。离心后倒出上清液备用。 （iii）用容量为13-14ml，最高转速在40,000-41,000rpm 的甩平转头，钛合金吊桶，PA 离心管，每管下部铺设2ml，5.7M CsCl（在溶液II 中），上部为（ii）离心后的上清液。离心转速31,500rpm（约185,000xg），10℃离心18 小时，或用固定角式转头，每管下部铺设3ml，5.7M CsCl （在II 中），上层的（ii）离心后的上清液， 65,000rpm（约410,000xg），10℃，离心2 小时（慢加速，慢减速）。 （iv）离心后，小心地倒去上层蛋白质，中层的DNA，已经初步纯化的RNA 沉淀在离心管底部。 （v）沉淀中加入0.5ml 溶液I 并移入1.5ml eppendorf 管，再在微量离心管中加入0.5ml 溶液I，摇匀。 （vi）在离心管中加50μl，1M 醋酸（在500μl 乙醇中）。 （vii）离心管置于低温冰箱中-20℃静置1 小时以上。 （viii）台式离心机12,000rpm（约11,000xg）离心10 分钟。倒去上清液，沉淀为RNA （进一步纯化的）。 （ix）沉淀溶于400 μl 溶液II 并假如40μl 3M 醋酸纳（PH5.0）（在880μl 乙醇中）。 （x）-20℃静置过夜。 （xi）第二天，用高速台式离心机12,000rpm（约11,000xg）离心10 分钟，倒去上清液， 沉淀用70%乙醇洗二次。 （xii）将RNA 溶于II，用凝胶电泳检测（用薄层扫描仪或凝胶电泳分析仪分析结果）RNA 构型，用分光光度计（1 毫克/毫升RNA 在260nm 时光密度为25）测定RNA 浓度。 （xiii）将已知构型及浓度的RNA 在-20℃储存。 例（5）：用KI 梯度分离RNA 片断。 （i）将DNA 样品溶于15mM 柠檬酸钠，10mM 亚硫酸钠，5mML 磷酸钠（PH7.0）中，最终浓度不超过50μg/ml。 （ii） 每毫升RNA 溶液加入1.0 克KI，充分溶解后用折射仪测定RI=1.4290，如过高，过低必须修正到比值。 （iii） 将以上溶液充满12ml，PA 快速密封离心管，密封后置于固定角式转头中，150,000xg，20℃离心60 分钟。 （iv） 分部收集离心管中梯度液（30-50 管），可用RNA 试剂定位，如果RNA 已做同位素标记，可用液闪仪定位。如果用后一种方法，在分部收集管每管中加一滴（25 μl 左右）巯基乙醇以避免在液闪仪液体中产生自由离子。 （v） 用此法可以分离单股与双股RNA。
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