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液闪测量技术在中医药研究中的应用及前景展望

2020.7.14
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

液闪测量拄木是一种利用液体闪烁计数嚣进行体外放射性测量的技木.最有利于探测离体样品中3H、14C等发射的穿透力租弱的软β射线。具有灵敏度高、特异性强等优点。这一技木的应用使中医药的研究更加深^,并已成为沟通传统医学与现代医学的渠道,为中酉医结合的研究作出了很大的贡献。迄今,该技木已应用于中医药研究的各个领域,现将有关资料综述于下:

 

1中草药前研究中的应用

在已建立的40多种免疫检测中草药有效成分的方法中,放射免疫分析占70%以上.由于多采用H标记。因而液闪测量技术就显得尤为重要。如青蒿素青蒿罱检测方法的建立国外有学者应用该技术建立了测定钙质生成植物中的总VD衍生物的方法.等等我国中草药资源丰富,寻找新的活性成分是中药研究的一项艰巨任务。

近年来液闪测量技术在中药药理研究中的应用更加广泛。它不仅可以用来测定生药及其在人体中的有敢成分,以及用药后人体各微量生物活性物质含量变化,而且为中药药理研究深到分子水平做出了很大贡献。


在中药有效成份的研究中,太枣、茵胨、丹参等中药中环核昔酸的含量,哈士蟆油中的睾酮、孕酮、雌二醇等甾体激素等均可用液闪进行测量。周文浴等人以3H小檗碱3H.诛片为示踪剂.观察大鼠外敷中药消炎是的透皮吸收,用液体闲辑计数器检测用药大鼠血}瘦脏器组织、粪、尿的艘射性,结果表明:3H冰片的可能透皮量不足外敷总量的5%,外敷的3H小碱也大半留在体外;提示外敷中药是能部分透过皮肤的,但透皮量有限.且因组分不同而异。推测外敷中药对病变组织除可起部分直接作用外,可能还通过其它机制起作用。


根据放射免疫原理.应用液闽测量拄术可测定体外样本中血栓素.前列腺素、环磷酸腺苷、宴质酮等微量物质含量。观察用药后这些微量物质含量变化是阐明中药作用机理及指导临床用药的重要依据。邓常青等通过检测兔脑缺血再灌注损伤模型脑血栓紊TX&6-酮前列腺素及血浆和毡环磷酸晾苷的含量,对组成益气活血方的黄芪和活血方的作用机理进行了比较研究,发现活血方和益气活血方均可抑制兔脑映血再滟注后脑TX的升高,提高脑6一酮一前列腺索R含量。活血方还可抑制脑cAMP的升高,黄芪则对此无明显影响。提示益气活血法通过改善脑局部TXA2/PGI:平衡而起作用,且主要为活血药物作用在研究周真方老年大鼠海马和下丘脑一垂傩一肾上腺皮质轴(HPA轴)的作用中通过检测血浆皮质酮含量,发现固真方能显著降低老年大鼠增高的血浆皮质醇含量,结台糖皮质澈素受体分析结果,加深了对谖方延缓老年大鼠海马和HPA轴退化作用的认识。余林中等人在研究瘟膈散解热作用机理中发现,该药能抑制中枢性发热介质PGB、cAMP合成释放,继而影响丘脑下部体温调节中枢。

 

近年来,与分子生物学技术相结台,液闪测量技术在中药药理研究深入到分子水平的过程中发挥了很大作用。李应东等人以外周血淋巴细咆非程序DNA台成(UDS)为观察指标,用3H标记DNA合成前体物质,通过液闪测量研究了莪木和硫酸镍的遗传毒性教应厦莪术对硫酸镍诱导的^外周血淋巴细胞UDS的影响.发现莪术在一定剂量时可明显减轻硫酸镍对外周血淋巴细胞DNA的损伤,而其本身无致突变作用。但当莪术剂量达到1g/ml时,对DNA的修复造成已造成抑制。还有作者I在对抗衰老中药原研究中,以3H甲基掺入法测定大鼠脑中DNA甲基化酶活性,发现在长期服用神方补臂生血药后,该酶比活力增高,酶的热稳定性和对NaC[的耐受力略有增强。并结台蛋白成分的分折说明神方补肾生血药可改变太鼠脑DNA甲基化酶活性和酶学性质.从而影响DNA甲基化水平,可能是该药抗衰老作用的途径之一。还有作者采用H掺入法检铡DNA聚台酶和逆转录酶活性,证实了疏肝利胆冲剂具有明显的抑制以上两种酶的作用,为临床用药提供了实验依据。

 

2中医基础理论研究方面的应用

中医基础理论具有丰富的内涵,但目前的中医还不县备用准确的理论概括其基术特征的能力,在从经验医学向科学医学转化的过程中应用现代化的检测技术故方法为中医服务是十分必要且行之有敬的。在舌苔原理的缘合实验研究中,发现厚苔者Ac MP、cGMP同时升高,提示其细胞分裂和分化加速,而角化脱落相对延缓;病理白薄菩两者均低于正常,薄黄苔两者均高于正常,提示分裂和分化处于不同水平的相对平衡;剥脱者cAMP和eGMP水平亦较高则可能与某些母煮致使细胞过早变性坏死有关。

钱汝红等人在内燥和内湿的实验研究中,对五组大鼠(常体寒体、热俸、内燥组、内湿组)分别进行研究,将其外周血淋巴细胞DNA经紫外线照射损伤,采用H掺入法培养后收集细胞液闶测定。通过观察淋巴细胞DNA损伤后修复能力的差异,进一步探讨体质类型及其转变时的细胞学基础。结果表明:内燥组的3H TdR揍入值小于热体组,内湿组的3H -TdR掺入值小于寒体组,差异都显著,提示DNA的3H TdR掺入值可作为区别正常体质和病理体质的指标之一。

 

在针刺研究中,应用液闲测量针剌后,体滩及组织中钎校苷酸、血栓索、前列环索等微量物质古量的变化,同样有助于针剌作用机理的研究。有研究表明。针剌内关穴可抑制缺血心肌细胞内cAMP过度升高,可防止因细胞膜cd通透性增大而致的心率失常,减少心肌耗氧量;降低延髓组织中Ac MP、cGMP含量,通过诃整延髓心血管中枢,改善急性心肌靛血病人的心功能状态;降低血中cAMP音量,说明针蒯内关可抑制机体过度强烈的应激反应。港免心脏负担加重.利于缺血心肌的恢复。另有研究表明“针刺心经经脉和针触肺经经脉均有降压作用,且针剌心经降压强度大于针刺肺经。其中升高血清前列环索水平是针刺降压作用机理之一。

 

3中医临床研究方面的应用

中医临床以辨证施治为本,临床医生根据对患者望、闻、问、切所得资料,用八纲、脏腑辩证综台纳丹型,又依据不同分型予以应治疗,应用液闪测量技术对中医疾病分型进行相关检测以及对疾病病因、病理转归、预后予以科学分析.不仅为中医临床辨证施治提供科学依据,也阐明了中医辨证实质和药物作用环节。

应用液闲测量技术检测中医辨证患者体渡中活性物质或其它功能指标,并以此为辨证分型的基础观察其与中医分型的关系。如:对虚寒、虚热证患者尿PGE2,PGF2排出量的临床观察,发现虚寒患者尿PGE2排出量下降:虚热患者尿PGE2排出量升高PGF2无明显变化.PGE/PGF2值升高。提示PGE2、PGF2与中医寒热辨证密切相关。

 

4前景与展望

近年米,科研工作者应用液闪泓量技术在中医药研究中做了大量实际工作,并已探人到中医的理、法、方、药等各个领域,为中医临床辨证施治提供了科学依据,为进一步深人研究获得了有价值的资料虽然液闪测量技术具有放射性同位素废物处理困难,试剂成本较贵等不足之处,但由于其快速、精确、专一、样品不需纯化、超微量(最小测量值可达10 -15水平)等突出优点,仍无法被其它方法取代。而且.该技术与分子生物学等其它相关技术的联合应用.使得中医药研究更加探人.甚至渗透到一些过去无法研究的课题。


综上.积极地运用现代科学技术促进中医自身发展,造已经成为绝大多数当代中医人士的共识。液闪测量技术正在中医药研究中起着越来越大的作用,相信随着研究的深入和发展。它必将为发掘中医药学宝,以及中医现代化做出更大贡献。


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