主要是在出现非特异条带时可以考虑用降落PCR,在高的退火温度下做几个循环,这样扩出的产物特异性好,可以做为后续反应的模板,然后再温度较低的情况下以前面扩出来的较特异的产物做模板,这样不但特异性好,而且产物也够多,可以出现很好的结果。
还有就是在刚合成引物还未经鉴定效果的时候,可以用降落PCR ,但是正如上面说的你的两个引物的TM值相差的有点大,一般降落是在TM值以下3-5度开始将,每个循环降0.5或1度,降差不多十个循环后,再维持在最后一个循环的温度上,不要担心最后的循环数目不够,其实只要模板量没问题,二十个循环足够了。
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