测试方法摸索

当选择合适的色谱柱时，不同基体颗粒(杂化、硅胶、聚合物)的特性差别，会造成保留性能、选择性的差别，了解这一点是很重要的。根据基质表面残余的硅醇基团数量的不同以及封端原因，可能会导致次级效应，另外不同的键合相可导致显著的选择性差别以及其它特性。

不同配体、不同选择性

·疏水性
- 更长的烷烃链提供更长的保留时间。
·硅醇活性
- 影响谱峰对称性和次级效应。
·水解稳定性
- 颗粒键合位点上配体数量越多，色谱柱寿命越长。
·配体密度
- 影响样品负载能力。

用传统的HPLC设备对具有不同pH值和有机改性剂的大量色谱柱进行摸索试验需要大量时间，而使用安装了ACQUITY UPLC 色谱柱管理器和填充了亚-2微米颗粒的高分辨率短色谱柱的ACQUITY UPLC®设备，可使试验从几天缩短到几小时。



色谱柱摸索试验：使用安装了ACQUITY UPLC 色谱柱管理器和ACQUITY UPLC色谱柱的ACQUITYUPLC设备测试摸索条件如图所示，图示这些条件的最终目标是得到一系列不同的色谱图，其能提供选择合适色谱柱所需信息。BEH C18色谱柱是非常好的通用C18，适于宽pH值范围使用，BEH Shield RP18为烷烃链C18提供选择性补充，BEH Phenyl色谱柱为这两种C18色谱柱提供选择性补充，为了满足极性保留的试验设计需求，也可选用HSS T3色谱柱。

pH 值的影响
·影响带如下可电离基团等的被测物。
- 胺
- 羧酸
- 酚
·有的化合物带一个或更多可电离基团
·pH值变化可产生最强的选择性效果