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系统化的方法开发和验证(四)

2020.7.20
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

测试方法优化

可通过对参数进行调节以微调和优化分离过程,物理参数-梯度坡度可用于调节保留性和选择性,但需要记住的是梯度坡度经常是分辨率和选择性的综合平衡结果。另一个可优化参数是温度,任何化学过程都受温度影响,温度不同可导致选择性的巨大差别。



色谱分析方法开发:当相关化合物浓度降低时,帕罗西汀相关化合物B和D的分辨率会急剧降低,这是由于其和帕罗西汀峰的浓度水平不相称造成的,需要继续优化。

方法优化和梯度坡度

·更小的梯度坡度可提高分辨率
- 降低梯度坡度将降低灵敏度。
·更陡的梯度坡度将压缩谱峰,经常会降低分辨率。
- 增加梯度坡度将增加灵敏度。
·改变梯度坡度需要平衡谱峰高度和灵敏度。
·保留性能和选择性的变化。

方法优化和温度

·降低移动相粘度。
·降低背压。
- 如果流动速度维持恒定。
·改善被测物分散性。
- 优化线性速度更高。
·保留性能和选择性的变化。

温度会影响中间的每一个化学过程,例如增加温度会降低移动相的粘度,如果流动速度恒定将导致系统背压降低,高温将改变固定相和流动相之间的分配速率,然而由于提高了被测物分散性,会加快优化线性速度。对温度变化敏感的化合物,温度的微小变化都会导致选择性发生独特变化。



色谱分析方法优化:此例子中,温度以15°C的步幅从30°C开始上升到40°C和60°C,随着色谱柱温度增加,组分的分离性能改善,另外被测物的分散性提高,谱峰更尖锐,色谱柱温度为60°C时分离效果最佳。

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