取样品洗脱液1.0mL加入重蒸馏水定容至2.0mL，用进样器吸取100mL注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积）。经过与黄曲霉毒素标准液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的浓度 。
2.4.4 空白试验
用水代替试样，按2.4.1~2.4.3步骤做空白试验。
2.4.5 结果计算
检测结果按公式（1）计算：
…………（1）
式中： — 试样中黄曲霉毒素（B1、B2、G1或G2）的含量，mg/kg；
— 试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1或G2的含量，mg/L；
— 空白试验黄曲霉毒素B1、B2、G1或G2的含量，mg/L；
— 最终甲醇洗脱液体积，mL；
— 最终净化洗脱液所含的试样质量，g；
— 试样称取量，g；
— 样品和提取液总体积，mL；
— 稀释用样品滤液体积，mL；
— 稀释液体积，mL；
— 通过亲和柱的样品提取液体积，mL。
黄曲霉毒素总量为B1、B2、G1、G2个别浓度之和，即B1+B2+G1+G2。
注：计算结果需扣除空白值。
计算结果表示到小数点后2位。
3 免疫亲和层析净化荧光光度法
3.1 方法提要
试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用蒸馏水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度。洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素（B1+B2+G1+G2）总量。
3.2 试剂和溶液
3.2.1甲醇（CH3OH）：色谱纯
3.2.2甲醇-水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水
3.2.3 甲醇-水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水
3.2.4甲醇-水（45+55）：取45mL甲醇加55mL水
3.2.5 苯：色谱纯 不要去掉
3.2.6乙腈：色谱纯
3.2.7苯-乙腈（98+2）：取2mL乙腈加98mL苯
3.2.8氯化钠（NaCl）
3.2.9磷酸氢二钠（Na2HPO4）
3.2.10磷酸二氢钾（KH2PO4）
3.2.11氯化钾（KCl）
3.2.12 溴溶液储备液（0.01%）：称取适量溴，溶于水，配成0.01%的储备液，4℃避光保存。
3.2.13 溴溶液工作液（0.002%）：取10mL 0.01%的溴溶液加入40mL水混匀，于棕色瓶中保存备用。需每次使用前配制。
3.2.14 二水硫酸奎宁（C20H24N2O2×H2SO4×2H2O）
3.2.15 硫酸溶液（0.05mol/L）：取2.8mL浓硫酸，缓慢加入适量水中，冷却后定容至1000mL。
3.2.16 荧光光度计校准溶液：称取3.40g硫酸奎宁（C20H24N2O2×H2SO4×2H2O）用0.05 mol/L硫酸溶液稀释至100mL，此溶液荧光光度计读数相当于20 mg/L黄曲霉毒素标准溶液。
3.3 仪器和设备
3.3.1 荧光光度计
2.3.2 高速均质器：18,000 r/min ~22,000 r/min。
2.3.3 黄曲霉毒素免疫亲和柱。
2.3.4 玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5μm。
2.3.5 玻璃注射器：10 mL，20mL。
2.3.6 玻璃试管：直径12 mm ，长75mm，无荧光特性。
2.3.7 空气压力泵。
3.4 分析步骤
3.4.1提取
同本标准2.4.1。
3.4.2 净化
同本标准2.4.2。
3.4.3测定
3.4.3.1 荧光光度计校准
在激发波长360nm，发射波长450nm条件下，以0.05mol/L硫酸溶液为空白，调节荧光光度计的读数值为0.0 mg/L；以荧光光度计校准溶液（3.2.16）调节荧光光度计的读数值为20.0 mg/L。
3.4.3.2 样液测定
取上述净化后的甲醇洗脱液加入1.0mL 0.002%溴溶液，混匀，静置1min，按3.4.3.1条件进行操作，于荧光光度计中读取样液中黄曲霉毒素（B1+B2+G1+G2）的浓度 （mg/L）。
3.4.4空白试验
用水代替试样，按3.4.1~3.4.3步骤做空白试验。
3.4.5结果计算
检测结果按公式（2）计算：
…………（2）
式中： — 试样中黄曲霉毒素（B1、B2、G1或G2）含量，mg/kg；
— 试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1或G2的含量，mg/L；
— 空白试验黄曲霉毒素B1、B2、G1或G2的含量，mg/L；
— 最终甲醇洗脱液体积，mL；
— 最终净化洗脱液所含的试样质量，g；
— 试样称取量，g；
— 样品和提取液总体积，mL；
— 稀释用样品滤液体积，mL；
— 稀释液体积，mL；
— 通过亲和柱的样品提取液体积，mL。注：计算结果需扣除空白值。
计算结果表示到小数点后1位。
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