上皮细胞培养

1）表皮细胞培养

1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮

肤更好，切成0.5～1平方厘米小块。

2．EDTA处理：先置入0.02％EDTA中室温置5分钟。

3．冷消化：换入0.25％胰蛋白酶中，置4℃过夜。

4．分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。

5．温消化：取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25％胰蛋

白酶中，37℃再消化30～60分钟。

6．用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液。

7．培养液：通过80目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清，直接加入Eagle

液和20％小牛血清，制成细胞悬液，接种入碟皿中，CO温箱培养。2

2） 乳腺组织培养

直接培养法：（适于培养含纤维少的软组织）

1．在含有少量培养液或Hanks液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块。

2．把组织碎块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻，

置试管架3～5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2～3次。

3．末次处理结束后，向沉降管中再补加培养液，用吸管稍吹打，使沉降物重悬。

不待细胞团块下降立即通过3～4层无菌纱布滤入另管中。

4．调整好适宜密度，接种入培养瓶中培养。

胶原酶消化法：（适于处理含纤维多的较硬组织）