原理
DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中，制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。
蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。在匀浆后提取 DNA 的反应体系中， SDS 可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA 分子分离， EDTA 抑制细胞中 DNase 活性，蛋白酶 K 或链霉蛋白酶 E 将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使 DNA 分子完整地分离出来。再用酚、酚/氯仿抽提除去蛋白质，接着用氯仿抽提以除去 DNA 溶液中微量酚的污染。最后用无水乙醇沉淀 DNA 。为获得高纯度 DNA ，操作过程中常加入 RNase 除去 RNA 。获得高分子量 DNA 的关键是防止 DNase 降解 DNA 。故标本必须新鲜，在提取前细胞就保持完整，核、溶酶体等细胞器应没有明显破坏，提取 DNA 用的离心管等器皿及试剂应消毒。操作在4 ℃以下进行。
操作
1 ．组织 DNA 的提取
1) 取小鼠新鲜肝组织，去除结缔组织，用剪刀剪成细小碎块
2) 加 10 倍体积 TE 缓冲液，用玻璃匀浆器在冰浴中中速匀浆
3) 将匀浆液转入 10ml 离心管以 4000rpm 离心 10 分钟，弃上清
4) 加 10 倍体积 TE 洗一遍，以 4000rpm 离心 10 分钟，弃上清
5) 加适量 TE 稀释
6) 取 400µl 稀释液于 1.5ml 的 Eppendorf 管，缓慢加入 10 %SDS 溶液，至终浓度 0.5 % ( 加 20µ1) ，摇匀直至溶液变粘稠
7) 加入 Rnase(200µg/m1) 至终浓度 20ug/m1(42µl) 混匀，置 37 ℃保温 60 分钟总体积 (420µ1) 。
8) 加蛋白酶 K(20mg/m1) 至终浓度 100ug/m1 混匀 ( 加 21u1) ，于 50 ℃保温 3 小时，并间歇搅动 ( 总体积 441µ1) 。
9) 将此溶液冷却至室温，加等体积饱和酚抽提，以 10000rpm 离心 10 分钟。
10) 取上清加 1/2 体积饱和酚， 1/2 体积氯仿／异戊醇抽提一次，以 10000rpm 离心 10 分钟
11) 取上清，加等体积氯仿/异戊醇抽提一次，以 10000rpm 离心 10 分钟
12) 加 1/10 体积 5MKAc ，加 2 倍体积无水乙醇充分混匀，以 12000rpm 离心 10 分钟
13) 加 lml70 %乙醇洗沉淀，以 12000rpm 离心 10 分钟
14) 待酒精挥发尽后加 20ul TE 溶解， 4 ℃储存
2 ．电泳鉴定
取 DNA 样品 2µ1 加上样缓冲液 10µ1 ( 含溴酚蓝指示剂和甘油 ) ，在 0.8 %琼脂糖凝胶进行水平微型电泳，电压 <5V/cm ，时间 2 小时左右。电泳后取出凝胶，用 0.5µg/ml 的溴化乙锭染色 20 分钟，用紫外灯观察分析。
试剂及器材
1 ．试剂
蛋白酶 K ：称取 20mg 蛋白酶 K 溶于 lml 消毒双蒸水中，－ 20 ℃备用。
RNase( 牛胰 ) ：称取 10mgRNase 溶于 lml 下列混合液中： 10mmol/l Tris-HCl ， pH8.0 ； lmmol/L EDTANa2 pH8.0 ； 50 %甘油。
10 %SDS 溶液：称取 10gSDS 溶于 100ml 消毒双蒸水中，于 65 ℃保温 2 小时，贮存室温备用。
1 × TE 缓冲液 (pH8.0) ： 10mmol/L Tris-HClpH8.0 ； lmmol/LEDTANa2 pH8.0 。配制后高压灭菌， 4 ℃贮存。
1 × TE 饱和重蒸酚 (pH8.0)
氯仿/异戊醇 (24:1V/V)
10mol/LNH4 AC ，配制后高压灭菌， 4 ℃贮存
无水乙醇 (AR)
70 %乙醇
2 ．器材
玻璃匀浆器；离心机；电泳仪；电泳槽；紫外透射反射分析仪。
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