试剂、试剂盒 乙醇曙红Y 梅耶苏木精超纯水二甲苯

仪器、耗材 圆锥管镊子破璃染缸

实验步骤

一、材料

1.缓冲液、溶液和试剂

100%乙醇

70%乙醇

曙红Y(Sigma)

梅耶苏木精（Sigma)

DEPC处理的超纯水(BiotecxLaboratories，储存于4°C)

二甲苯(Sigma)

2.特殊设备

圆锥管，50ml

镊子

破璃染缸（用于二甲苯的盛放）

3.细胞和组织

来自方案1的片子

二、方法

染色应尽可能和LCM操作之间安排紧凑，尤其是H20和最后一步的乙酵一定要新鲜。要时刻记住降解的RNA数量与固定后样品在水相中的时间成正比（为了得到高质量的RNA，最好不要超过5mm)。在所有的步骤中都使用DEPC处理的水。最后一步的乙醇和二甲苯可能吸潮，如果湿度较高，推荐将片子在100%乙酵中过3次，第二次放于二甲苯中时洗2min。如果湿度低，省略第三次的纯乙醇，并缩短二甲苯的时间到30s。在每进行下一步之前都要擦掉片子边缘和背部的水。有时片子排拒溶液，必要时重复。用镊子夹住片子。

1.准备染色液（图11-3)。

2.浸于70%的乙醇中30s。

3.纯水洗（不要用PBS代替水，如果选用了PBS就会导致组织与LCM膜间黏着欠佳），在染缸中上下移动切片，5~30s。

4.梅耶苏木精（Mayer’shematoxylin)30s

5.纯水洗（不要用PBS代替水，如果选用了PBS就会导致组织与LCM胰间黏着欠佳），在染缸中上下移动切片，5~30s。

6.70%的乙醇洗30s。

7.100%的乙藓洗30s。

8.曙红Y中30s。

9.100%乙醇洗30s,重复2~3次。

10.二甲苯洗0.5~2min，2次。此时用于LCM样品准备完毕。