用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子
实验材料 T4RNA连接酶供体RNA受体RNA
试剂、试剂盒 10XT4RNA连接酶缓冲液无核酸酶的水FEGRNA酶抑制剂
实验步骤
一材料与设备
1)10XT4RNA 连接酶缓冲液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl2，5 mmol/LDTT,1 mmol/L ATP
2) 无核酸酶的水
3)FEG(polyethyleneglycol)40%
4)RNA 酶抑制剂
5)T4RNA 连接酶
6) 供体（donor)RNA
7) 受体（acceptor)RNA
(二）操作方法
1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：
供体 (donor)RNA 100-500ng
受体 (acceptor)RNA 250ng
10XT4RNA 连接酶缓冲液 4ul
RNasin 核酸酶抑制剂 (40U/ul) 1ul
PEG,40% 20ul
T4RNA 连接酶 (9-12U/u1) 1ul
补无核酸酶的水至终体积为 4u1
2)37℃ 孵育 30 min，或 16℃ 反应过夜.
3) 纯化回收，一 20℃ 保存。
注意事项
1) 供体（donor)RNA 分子如Poly(A)+RNA) 必须包含 5＇磷酸基团。
2)RNA 分子能有效的被多聚核苷酸激酶磷酸化。
