实验方法原理

蛋白质通过氨基键氧的烷化固定到聚合物上。这个反应的烷化试剂必须由二乙醚中的表氯醇（1-氯-2，3-环氧丙烷）和三氟化硼二乙基醚盐合成，方程式如下：

合成过程中要严格避免水的痕迹，同时要考虑到试剂的毒性。

实验材料 蛋白质溶液

试剂、试剂盒 二乙醚表氯醇三氟化硼二乙基醚盐二氯甲醇

仪器、耗材 滴液漏斗

实验步骤

用一个滴液漏斗把 50 ml 溶有 10％（体积分数）表氯醇的二乙醚缓慢滴入 200 ml 的溶有三氟化硼二乙基醚盐的 5％（体积分数）的二乙醚溶液中流煮 1 h 之后，混合物在室温条件下摇动 3 h。沉淀的三乙基氧四氟硼酸用干二乙醚冲洗 3 次，最终溶于二氯甲醇中浓度达到 100 g/L。在图 1 中显示了根据反应的程序发生的聚酰胺的烷化。通过在溶有 100 g/L 三乙基氧四氟硼酸的二氯甲醇中室温孵化适当数量的入造聚酰胺的外套 15 min，含盐的聚酰胺形成了。过量的烷化试剂分别用二氯甲醇和二氧杂环乙烷在吸滤器上冲洗两次来去除。

这是一种相对辛苦的方法，这是由于需要严格的排除水而且物质有毒。有机溶剂可能也能溶解入工外套的组成成分，如修饰和黏合，从而影响其稳定性。另一方面，烷化条件能够通过烷化试剂的反应时间和浓度的变化来调整。

聚酰胺的亚胺盐很容易反应，必须立即试验。可以采用不同的固定策略：

1. 通过与浓缩的酶溶液孵化来直接固定；

2. 为了引入一个间隔物，聚酰胺亚胺盐在溶有 100 g/L 1，6-己二胺溶液的甲醇中室温孵化 3 h。多余的试剂用甲醇多次冲洗除去。

3. 酰肼取代的聚酰胺通过在室温孵化 3 h 获得，孵化是在聚酰胺亚胺盐和溶有 30 g/L 己二酸酰肼溶液的甲酰胺中进行的。多余的试剂用溶剂多次冲洗除去。

衍生物是无毒的，可在室温储存数月，并在任何时候都能恢复活力。

酰肼取代的聚酰胺活性能够用溶有亚硝酸钠的盐酸来恢复，如图 2 所示。叠氮化物的基团形成从而能结合蛋白质。或选择，戊二醛能与氰乙酸的氨基酸末端基团形成希夫碱，蛋白质能够与希夫碱的试剂的另一个乙醛基团连接。