实验方法原理

实验材料 半胱胺

试剂、试剂盒 过氧化物酶SMCC-溶液

仪器、耗材 交联葡聚糖 G-25 色谱柱分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

将 10 mg 过氧化物酶溶解到 1 ml 0.1 mol/L pH 7.0 放入磷酸二氢钾中，加热至 30℃，并加入 60 ul SMCC 溶液（终浓度 15 mmol/L），缓慢搅拌 1 h。离心分离沉淀，将上清过柱（交联葡萄糖 G-25），并用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾洗脱。用超滤器将含有过氧化物酶的组分（先洗脱，而后测定酶活或测定 280 nm下吸收值）浓缩至 10 ml，然后加入约 10 mg 硫醇抗体，反应产物可通过凝胶过滤进一步纯化。

注意事项

其他

试剂：

过氧化物酶（辣根）

SMCC-溶液（4-｛N-马来酰胺甲基｝环己烷-1羧酸-N-羟丁二酰亚胺酯，Mr＝334.3；溶解 5 mg 于 60 ul N，N'-二甲基甲酰胺，30℃）

交联葡聚糖 G-25 色谱柱，约 1.5 cm×30 cm，用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾平衡

0.1 mol/L 半胱胺（Mr＝77.2；77.2 mg 溶于 10 ml 水中）