实验方法原理
4-α-D-葡聚糖葡萄糖水解酶,葡聚糖 1,4-α-葡糖苷酶
通过水解末端 1,4- 和 1,6 连接的 α-1,6-葡糖苷键释放 β-D-葡萄糖。这个实验与 α-葡糖苷酶类似,只是用糖原代替麦芽糖作为底物。一段时间以后(5 min)反应停止,葡萄糖被测出与己糖激酶/6-磷酸葡糖脱氢酶偶联。
实验材料 酶样品
试剂、试剂盒 乙酸缓冲液糖原溶液Tris(羟甲基)氨基甲烷
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.54 ml 0.1 mol/L 乙酸缓冲液,pH 4.0
0.25 ml 糖原溶液
0.01 ml 酶样品
25℃ 培养 5 min,而后加入 0.2 ml 0.3 mol/L Tris 停止反应。同「α-淀粉测定实验」提到的那样,测量满足 α-葡糖苷酶的葡萄糖量(对比没有酶的空白对照)
注意事项
其他
试剂:
0.1 mol/L 乙酸缓冲液,pH4.0(5.7 ml 乙酸,100%,Mr=60,溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L NaOH 调至 pH 4.0,补充至 1 L)
糖原溶液(牡蛎中提取的糖原 80 mg 溶于 10 ml 水中)
0.3 mol/L Tris(羟甲基)氨基甲烷(Mr=121.1;363 mg 溶于 10 ml)