实验方法原理
L-苹果酸:NAD 氧化还原酶,MDH。
L-苹果酸 + NAD+⇌ 草酰乙酸 + NADH + H+
实验首选逆反应。
实验材料 MDH 稀释溶液
试剂、试剂盒 磷酸钾NADH草酰乙酸
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml MDH 稀释溶液
25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
其他
试剂
0.1 mol/l 磷酸钾,pH 7.5
0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于 10 ml H2O)
0.1 mol/l 草酰乙酸(Mr=132.1,132 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/l 磷酸钾,pH 7.5 中)
MDH 原料溶液(例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH7.5 稀释至 1 IU/ml)