重组生物技术制备的单克隆抗体（以下简称重组单抗）是生物制品中一类重要的药物类别。近年来，由于其精确的靶向杀伤和中和等生物学效应，重组单抗在肿瘤、自身免疫性疾病等方面受到了广泛的研究和应用，并且在神经学、眼科学等其他疾病领域的研究也开始逐步发展起来。目前，国内生产的重组单抗主要采用真核细胞培养表达的方法，在工艺研发和质量研究方面，药品企业对主要有效成分的结构研究和质量控制关注较多，但是对产品组成中的杂质和相关物质研究较少或关注度不够。考虑到这些杂质或相关物质是重组单抗产品中的重要组成部分，将会影响到产品的质量、临床应用的安全性和有效性。

　　本方法主要采用CAPEL-205高效毛细管电泳仪测定重组治疗性单克隆抗体（免疫球蛋白G，IgG）中产物的相关杂质，参照的是美国药典第129章(Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies, Capillary SDS electrophoresis) 中的方法，也可以参照中国药典2015版三部三部通则3127（

　　单抗分子大小变异体测定法）中的方法。

　　1测试条件

　　USP129.还原条件

　　BGE：按照USP 129 中的凝胶条件

　　毛细管电泳: Ltot = 30 cm, ID= 50 µm

　　样品进样: -5 kV x 20 sec

　　电压: -15 kV

　　室温: 25 ОС

　　检测波长: 220 nm

　　 样品: 重组IgG制剂

　　 IS – 内标

　　 LC – 轻链

　　 NG – 非糖基化重链

　　 HC – 重链

　　USP129.非还原条件

　　BGE：按照USP 129 中的凝胶条件

　　毛细管电泳: Ltot = 30 cm, ID= 50 µm

　　样品进样: -5 kV x 20 sec

　　电压: -15 kV

　　室温: 25 ОС

　　检测波长: 220 nm

　　 样品：重组IgG制剂

　　 IS -内标

　　 F1-F8 -IgG相关杂质（片段）

　　 IgG -完整抗体

　　2测试结果

　　图1 还原条件下的检测色谱图

　　图2 非还原条件下的 检测色谱图

　　3结论

　　采用CAPEL-205高效毛细管电泳仪测定重组治疗性单克隆抗体（免疫球蛋白G，IgG）中产物的相关杂质，可以实现的IgG产物中的相关杂质的有效分离，方法准确、灵敏度高、重现性好，可以满足日常分析要求。

　　4配置列表

　　仪器配置

　　CAPEL-205毛细管电泳系统，装有WINDOWS®XP/ 7/8/10操作系统的笔记本电脑

　　ELFORUN专用软件工作站

　　Capel-205M.jpg

　　Capel-205毛细管电泳仪的优势特点

　　通过施加高压电场，基于毛细管液体样本组成成分迁移速度的差别。应用UV吸收检测技术，在毛细管出口应用高精度光学系统定量检测分离出的组分

　　光源：高强度氘灯，优化光学设计保证低检出限

　　可实现多种不同分析方法和分离模式，毛细管区带电泳，毛细管胶束电动色谱，毛细管等电聚集，毛细管凝胶电泳，毛细管等速电泳

　　全自动进样，进样方式可选电动及压力进样。压力进样，步进值1mbar，最高99mbar；电动进样，电压范围：步进值1kV，1-25kV可调

　　毛细管冷却：恒温水冷系统，环境温度5-50℃可调；恒温水冷保证温度控制更加精细和准确，提高分析效果（相对与风冷，冷却效果更优/与液冷相比，成本更低）

　　标准离心管1.5mL(Eppendorf型)适用于所有样本分析

　　扩展的全自动进样器，高达59个进样位，允许提供自动过夜分析功能

　　独特全自动开口进样设计，避免挥发和交叉污染

　　新型高压模块提供±30kV压力，保证超优的分析效率和快速分析时间

　　采用流动电位控制技术，极大提高重现性，尤其是分析复杂样品更具优势