细胞凋亡：流式细胞仪检测实验

实验方法原理

实验材料 要分析的细胞在FACS缓冲液中

试剂、试剂盒 FACS缓冲液冰冷的100%乙醇（如果细胞是抗体标记的则用70%乙醇）1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙锭（PI)的PBS

仪器、耗材 流式细胞仪

实验步骤

1)凋亡刺激后，从培养液中沉淀所要分析的细胞，同样沉淀一未处理的对照培养液。重悬于3 ml的冰冷的FACS缓冲液，然后300 g离心5 min沉淀细胞。轻轻晃动试管以重悬沉淀。

如果同时对细胞其他表面表达的Marker染色，这步应该在固定之前做。

2a)如果细胞没有被其他荧光团标记的抗体染色：重悬细胞于FACS缓冲液，边涡旋振 荡边加入1倍体积的冰冷的100%乙醇，通过这样的方式固定细胞。室温孵育细胞 30 min。

2b)如果细胞被其他突光团标记的抗体染色：重悬细胞于500〜1000μL FACS缓冲液，边 轻柔涡旋振荡边加入3倍体积的冰冷的70%乙醇。于4℃孵育细胞，不少于1 h。使用乙醇作为固定剂，这点很关键。其他的固定剂比如戊二醛或甲醛由于染色质的交联不能尽 可能地保持亚二倍体峰值。

3)沉淀细胞。重悬于冰冷的FACS缓冲液，然后300 g离心5 min沉淀细胞。重悬细胞于250〜500μL含40μg/ml RNase A和50μg/ml 二碘化丙锭的FACS缓冲液。 室温暗室孵育不少于30 min。

4)用流式细胞仪（FL2或FL3)以线性模式（Holmes and Fowlkes, 1991)分析细胞。 可以通过选通低于大的G0/G1DNA峰值的区域的染色细胞来计算细胞凋亡的部分。