基 本 方 案 小 鼠 干 扰 素 诱 导 的 抗 病 毒 活 性 的 检 测

材 料

干扰素敏感的 L 929 成纤维细胞

E M E M 培 养 基（Eagle 氏最低要求培养基）

胰酶消化液

检 测 样 品（具干扰素活性的血清或培养上清）

小鼠干扰素的参照标准品 α -干扰素、β-干扰素、 γ-干 扰 素 以 及 αβ-干扰素（从美国马里兰州贝塞斯达国家过敏与感染疾病研究院 Laughlin 博士处获得）

水 疱 性 口 炎 病 毒（vesicular stomatitis virus， V S V ; 印第安纳株）

4°C 的 EBSS (Earles 平衡盐溶液）

5 % (W V ) 福尔马林

含 0.05% (m /V ) 结 晶 紫 的 2 0 % 乙醇

1 0 0 % 甲 醇（可选）

75c m 2 的直颈组织培养瓶（Falcon 或 Costar)

8 通 道 微 量 移 液 器（固定或调整至 50M1 和 IOOiLd; Costar)

9 6 孔 平 底 微 孔 板（Falcon 或 Costar)

8 孔 吸 液 器（D r u m m o n d ; Thomas Scientific)

倒置显微镜

定 轨 摇 床（可选）

微量 滴 定 板 读 板 仪（酶联仪）（可选）

1 . 将 约 I X l O6干 扰 素 敏 感 的 L 9 2 9 成 纤 维 细 胞 悬 于 25 ml E M E M 培 养 基 中 ，接种至75 cm2 组织培养瓶。在 37°C ， 6%(：〇 2 培养箱中培养约 1 周（或直至铺满培养瓶）。

2 . 向铺满细胞的培养瓶内加入 3m l 胰酶消化液，待细胞从培养瓶底脱离下来后收集获

辅 助 方 案 1 病毒培养体系的建立

附 加 材 料

辅 助 方 案 2 抗体中和实验

6 . 测定抗体制品的中和滴度，即中和掉 5 0 % 的 5U /m l 干扰素活性的抗体的最髙稀释度的倒数。

7 . 可选操作：抗体的中和活性以 U /m l 表示。效价乘 以 5 (调 整 为 中 和 5U /ml) ，再乘以 4 (调整为相对于加入的样品和细胞 4 倍稀释度的抗体），然 后 再 乘 以 5 (因为检测的体积为0.2 ml)。

备 选 方 案 人 干 扰 素 诱 导 的 抗 病 毒 活 性 的 检 测