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细胞的吞噬活动与矽肺发生的形态学观察实验

2020.8.24
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

实验方法原理 高等动物体内存在着具有防御功能的吞噬细胞系,其中粒细胞和单核细胞的吞噬能力最强,故称吞噬细胞,这些细胞随血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。 当机体受到异物入侵时,巨噬细胞在趋化因子的作用下向异物移动,然后伸出伪足包裹异物,将异物吞入细胞内形成吞噬泡,与溶酶体合并成次级溶酶体,通过溶酶体内的酸性水解酶将异物消化分解。


目前认为肺泡内的巨噬细胞在矽肺的发病过程中起关键性作用。当含有SiO2矽尘颗粒被吸入肺部后,被肺泡内的巨噬细胞吞噬,形成吞噬泡,与溶酶体合并后形成次级溶酶体,由于矽尘颗粒中含有SiO2,其表面的羟基与溶酶体膜的磷脂或蛋白质形成氢键,从而改变溶酶体膜的稳定性,引起溶酶体膜崩解,水解酶释放,最后导致巨噬细胞溶解、死亡、而含有SiO2矽尘颗粒释放,再次被其他巨噬细胞吞噬,如此反复进行。巨噬细胞大量死亡,其死亡时释放出的致纤维化因子,激活成纤维细胞,导致胶原纤维增生。同时,巨噬细胞死亡时释放出来的二氧化硅也可作为抗原,刺激免疫活性细胞,产生抗体,抗原抗体反应产生复合物和补体一起,沉积在胶原纤维上,使新形成的结缔组织呈透明样外观。

实验材料 公鸡静脉血成年小鼠

试剂、试剂盒 Alsever溶液生理盐水淀粉肉汤

仪器、耗材 显微镜注射器载片盖片

实验步骤

1、实验前两天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1ml(起标记作用),以诱导腹腔产生更多的巨噬细胞。


2、实验时,每四个同学取一只经过上述处理的小鼠,腹腔注射1%的鸡血细胞悬液1ml。


3、30min后,再向腹腔注射0.5ml小鼠生理盐水。


4、 30min后,颈椎脱位法处死小鼠。


5、用注射器取腹腔液滴片,盖上盖片。


6、显微镜观察


其他

1. Alsever溶液:葡萄糖2.05g,柠檬酸钠0.80g,NaCl 0.42g,溶于100ml双蒸水中。


2. 6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g蛋白胨 1.0g氯化钠0.3g台盼蓝(Trypan blue)粉0.3g


3. 蒸馏水 100ml煮沸灭菌,置4℃冰箱保存。


4. 小鼠生理盐水0.85g氯化钠溶于100m1蒸馏水中


5. 鸡生理盐水0.75g氯化钠溶于100m1蒸馏水中


6. 1% 鸡红细胞悬液自健康鸡翼静脉采血或从集市杀鸡处接血2ml(防止污染),放入盛有8ml AlseVer溶液瓶中,混匀置4℃冰箱保存备用(一周内使用)。使用前加入0.85%生理盐水离心(1 500r/min 10min)洗涤二次,再用生理盐水配成l%浓度悬液。


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