免疫组化染色具体操作步骤

　　免疫组化染色具体操作步骤介绍

　　 （以美国ZYMED公司SP试剂盒为例）

　　 1、石蜡切片脱蜡至水。

　　 2、3%H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

　　 4、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，（如需采用抗原修复，可在此步后进行）。

　　 5、 5~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。

　　 6、PBS冲洗，5分钟×3次。

　　 7、滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。

　　 8、PBS冲洗，5分钟×3次。

　　 9、滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。

　　 10、PBS冲洗，5分钟×3次。

　　 11、显色剂显色（DAB或AEC）。

　　 12、自来水充分冲洗，复染，封片。

　　 13、冰冻切片免疫组化染色步骤

　　 14、冰冻切片4~8mm,室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3.用3%过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟×2。

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　　来源：上海拜沃生物公司

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