做转染实验时小编就抱着一个信念，就是要给细胞点“颜色”看（荧光），但你知道吗？就这个简单的实验过程，小小的细胞却有着大大的能量，实验过程中带阳离子的脂质体充当着“搬运工”的角色将质粒从胞外“抓”到胞内，而细胞为质粒的复制、转录、翻译提供“场所和原材料”，自己也跟着“增光填色”,但“上色”过程中会遇到一些问题，总结下来主要有以下二个方面：
➙ 细胞状态差
➙ 转染效率低
本着“不会解决实验问题的技术员不是一个好技术员”的原则，下面小编就分享一下自己的经验。
Q1：转染后细胞状态较差
A：分析：主要是铺板和反应液配制的原因
⇒ 细胞状态是整个实验的关键，如果细胞状态不好，则转染后细胞状态当然就好不了
⇒ 铺板：过多或不均匀，细胞长的太满就会状态较差
⇒ 脂质体本身有毒性，如果脂质体加入量太多，会导致细胞状态较差，或者细胞死亡，建议在做正式实验前，先做一下预实验，摸索一下质粒和脂质体的配比。
Q2：转染后荧光效率低
A：分析：主要是细胞原因和“搬运”过程中的问题
❶. 细胞状态仍然是重中之重，如果有一段时间转染效果很不理想，必须要换一批次细胞；
❷. 加入目的质粒后轻轻混匀，太用力会破坏混合液的结构，
❸. 质粒与转染试剂的比值： 过高一部分质粒不能进入细胞，过低“搬运工”太多，有毒性且浪费；
❹. 吸、打液体时注意枪头内液面高度，是否完全打出；
❺. 反应液配好后等待20min，质粒才会被完全包裹；
❻. 反应液滴加加入细胞，使“脂质体+质粒”均匀分布；
❼. 质粒反复冻融影响浓度，尽量减少冻融次数；脂质体 -20℃保存，用完应马上放回；
❽. 必要时需要检测一下质粒的浓度是否准确；
经验就分享到这里，下面再分享最后一个小Tips
转染需48h，可以提前知道转染的效果吗？
根据经验转染24h时的荧光效果至少达到下图水平那么基本上不用担心了~
你学会给细胞“上色”了吗？欢迎提出更多的实验问题，大家一起讨论！
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