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无血清培养基的适应性

2020.8.31
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

   细胞培养实验中,培养基有着不可取代的地位。大家知道,血清是的天然培养基,而无血清培养基也有着功不可没的作用,被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等。今天的技术内容中,上海劲马为您分析解说无血清培养基在细胞培养实验中的适应性:  

   一、适应方法

    1.直接适应细胞从血清的培养基为基。

    2.连续的适应或脱机细胞从血清的培养基为SFM在几个步骤。

    连续的适应往往是细胞比直接适应严酷少。

   二、连续的适应

    通道1,75%血清的培养基:25%基

    通道2,50%血清的培养基:50%基

    通道3,25%血清的培养基:75%基

    从75%到100%的变化可能是太紧张的SFM细胞,可能需要把细胞2–3通道在10%血清的培养基:90% SFM混合物。大多数的细胞系可以被认为是完全适应后100% SFM 3通道。有时你可能会得到你过去的某一步甚至细胞之前100% SFM有麻烦。如果发生这种情况,回去和传代细胞2–3次血清前比补充媒体的无血清培养基。

   三、对无血清培养的思考

    总的来说,在无血清培养细胞的渗透压,pH,温度,机械力极端敏感,酶处理。

    1.抗生素

    不要在无血清培养基中使用抗生素。如果你这样做,我们建议您使用5到10倍不到你会在血清培养基中。这是因为血清蛋白会结合一定量的抗生素添加;没有这些血清蛋白抗生素的水平可能是某些细胞的毒性。

    2.高密度

    细胞必须与活力> 90%适应中的生长对数期。连续的适应可能是必要的。播种文化在一个更高的密度比正常在各通道在SFM适应可以帮助过程。因为有些部分的细胞不可能在新的文化环境中生存,有更多的细胞会增加活细胞数进一步通道。

    3.丛生

    细胞聚集往往发生在适应SFM。我们建议你轻轻地成团块打破他们当传代细胞。

    4.形态

    这是不寻常的在适应SFM后见细胞形态略有变化。只要倍增时间和细胞活性保持良好,在形态上的细微变化,不应该是一个值得关注的理由。

   四、对培养的适应

    为适应SFM的另一种方法涉及使用“条件培养基”。介质的细胞已生长在一个完整的通道,如果您选择这种方法,可以促进适应如下:

    通道1,100%血清的培养基

    通道2通道50%中从1:50左右SFM

    通道3通道50%中从2:50左右SFM


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