该法多用于检测多价大分子抗原，但不能用于检测半抗原等小分子物质。
【试剂及配制】
（1） 包被液（pH 9.6 碳酸盐缓冲液）
Na2CO3 0.16g
NaHCO3 0.29g
蒸馏水加至 100ml
(2)稀释液(pH 7.4 -Tween 20)
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H20 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Tween 20 0.5ml
蒸馏水加至 1000ml
(1) 洗涤液(0.01mol/L pH7.4 Tris-HCl- Tween 20)
Tri 2.42g
0.1mol/L HCl 13ml
Tween 20 0.5ml
蒸馏水加至 1000ml
(2) 底物溶液 见附录
(3) 终止液(2mol/L H2SO4)：浓H2SO422.4ml，加蒸馏水177.6ml。
(4) 封闭液（1%A pH 9.6 碳酸盐缓冲液）
【操作方法】
(1) 用包被液将以知抗体稀释成一定浓度，加于酶标板中，100ml/孔；
(2) 置湿盒内，4℃过夜；
(3) 弃上清，控干，加封闭液，200ml/孔，置湿盒内，37℃2h；
(4) 加洗涤液100ml/孔，静止3min，弃上清，控干；
(5) 重复步骤（4）2次，去除游离的抗原；
(6) 加入标准抗原和待检样本（视样本不同，按一定稀释度稀释），100ml/孔，置湿盒内，37℃1h；
(7) 弃上清，控干，重复步骤（4）3次；
(8) 加入一定浓度的mAb，100ml/孔，置湿盒内，37℃1h；若使用的抗体是酶标抗体，则步骤（9、10）省去；
(9) 弃上清，控干，重复步骤（4）3次，去除游离的抗体；
(1) 加入工作浓度的酶标二抗（羊抗鼠），100ml/孔，置湿盒内，37℃1h；
(2) 弃上清，控干，重复步骤（4）3次；去除游离的酶标抗体；
(12) 加入底物溶液，100ml/孔，避光室温反应15-20min；
(13) 加终止液，50ml/孔，用酶联检测仪测定OD值。