荧光显微镜的工作目标是对样品得到一个放大像，使原来肉眼看不见的细节能变得清晰可见。这里有两个基本的性能指标：一是分辨率极限，二是zui高有效放大倍数。分辨率是分辨物体细节的zui小极限。仪器可分辨的zui小细节经适当放大后，变成人眼所能看清者。显然，如果超越了仪器分辨率的能力，即使进一步提高放大倍数，也不能让人清晰看到更小的细节。这种现象必须借助于光的波动学说来解释。
奥林巴斯荧光显微镜中所用的可见光源是波长为400一800nm的电磁波。波传播的特性之一是衍射。衍射就是波遇到障碍物时能偏离直线传播的性质。根据基础物理知识可知，由于实际光学仪器都有限制光束的“窗口”（光学显微镜中的“窗口”就是物镜边缘所限制的透光范围），它造成的衍射效应会使每个物点形成的像都是有所扩展的衍射光斑。靠得太近的像点彼此重登起来，会使画面中的细节变得模糊不清。其它光学显微镜中还有一些像差（如球差和色差等）也会使像点展宽，但它们大多可以校矫正。所以衍射差就成了限制光学显微镜分辨率的*重要因素。
根据Huy8en分FmsMl原理可以得出：一个物点所形成的衍射像斑是一种强度大部分（约84％）集中在中心圆斑，而周围伴有强度逐渐减弱的若干离散同心环的衍射花样。中心圆斑（也称Airy圆斑）的半径r约为：
r≈0.16λ/sinθ
式中：λ—显微镜像方所用介质中的光波长
θ—物镜光阑（即物镜“窗口”）对像点所张的半角．亦称像方物镜孔径角或电子束半张角。光学仪器中通常采用Rayl出gh判据作为分辨率的标准，即当一个囚斑像约中心刚好落在另一相邻圆斑像的边缘上时，这两个俄恰好能被分辨。因此图像上可分辨的zui小距离众就是Airy圆斑的半径r。利用介质中的可见光波长入与真空中可见光波长的关系＝／n（n是物镜像方所用介质的折射率），以及奥林巴斯荧光显微镜物镜两侧有关参数的公式／M（是物镜与物之间介质的折射率，是物镜光阑对物点所张的半角，M是显微镜镑所决定的图像放大倍数）。
通常被称为显微镜的数值孔径（numericalaperture）。由式得知，因可见光的波长局限在400nm到800nm之间，故若要缩小可分辨距离久，就必须增大数值孔径。但是为此只能靠提高的值，具体做法可以是在载物片与物镜之间加油滴等。
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