原理
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱怀条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。
操作方法
1、取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3克，并按下表分别加入各试剂 ，混匀。
2、将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵管内，放入37℃保温1.5小时，观察发酵管产生气泡的量有何不同。
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杯号 |
5%葡萄糖（ml） |
10%三氯醋酸 （ml） |
碘乙酸 （ml） |
硫酸肼 （ml） |
发酵时 气泡多少 |
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1 |
10 |
2 |
1 |
1 |
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2 |
10 |
- |
1 |
1 |
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3 |
10 |
- |
- |
- |
3、把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2和3号杯中按下表补加各试剂，摇匀放10分钟后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤，取滤液进行测定。
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杯号 |
10%三氯醋酸（ml） |
碘乙酸（ml） |
硫酸肼（ml） |
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2 |
2 |
- |
- |
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3 |
2 |
1 |
1 |
4、取三个试管，分别加入上述滤液0.5毫升，并按下表加入试剂和处理。
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管号 |
滤液 （ml） |
0.75N NaOH |
室温放置10分钟 |
2，4-二硝基苯肼 |
38℃水浴保温10分钟 |
0.75N NaOH |
观察结果 |
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1 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
3.5 |
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2 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
3.5 |
|||
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3 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
3.5 |
试剂和器材
一、试剂
（1）2，4-二硝基苯肼：0.1克2，4-二硝基苯肼溶于100毫升2N 盐酸溶液中，贮于棕色瓶备用。
（2）0.56M硫酸肼溶液：称取7.28克硫酸肼溶于50毫升水中，这时不易全部溶解，当加入NaOH使PH达7.4时则完全溶解。此液也可用水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56M，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调PH 达7.4即可。
（3）5%葡萄糖溶液 （4）10%三氯乙酸
（5）0.75N NaOH溶液 （6）0.002M碘乙酸
（7）酵母
二、器材
（1） 试管（1.5×15cm） （2）吸量管（1、2、10ml）
（3）恒温水浴 （4）烧杯（50ml）
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