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采用ELISA来定量测定结合的噬菌体

2020.9.14
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

[器材和试剂]

● 洗涤缓冲液


● 结合缓冲液

● 辣根过氧化物酶(HRP)连接的抗M13单克隆抗体(mAb) (Amersham Biosciences)


● HRP底物㈠OPD(邻苯二胺,o-phe-nylenediamine) (Sigma)或AT 【2,2-连氮基-双-(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺 酸),2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazo-line-6-sulfonic acid)】 (Kinkegaard和Perry)

● 预先准备的噬菌体包被的微孔板


[方法]

1,每块板用洗涤缓冲液洗涤3次。

2.用结合缓冲液将HRP联结的抗M13单克隆抗体做1:5000稀释,每孔加入100ul,室 温下孵育30分钟。

3.每块板用洗涤缓冲液洗涤3次。

4.每孔加入lOOglOPD显色,不超过15分钟后用50ul 2.5mol/L的HzS04终止反应。5.检测每块板在492nm处的吸光度。


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