实验材料
1. 40 孔酶标板
2. 1:300 乙肝表面抗原溶液
3. 1:10 待测血清
4. 健康人血清
5. HBsAg 诊断血清
6. 辣根过氧化物酶标记羊抗人 IgG 抗体（酶标二抗）
7. 抗原稀释液（ pH9.6 碳酸盐缓冲液）
8. 洗涤液（ pH7.4 磷酸盐—吐温缓冲液）
9. 血清稀释液（含 0.1% 牛血清白蛋白的磷酸盐—吐温缓冲液）
10. 底物显色剂（邻苯二胺—— H 2 O 2 溶液）
11. 终止液（ 2M H 2 SO 4 ）
实验方法
1.包被抗原:用抗原稀释液将HBsAg按1:300稀释成工作浓度,加入到40孔酶标板1-9孔,每孔0.1ml。第10孔加稀释液作空白对照。酶标板置湿盒内,4°C孵育过夜。
2 ．洗涤：次日,甩去酶标板中液体,每孔加洗涤液至满,室温放置3分钟后,甩干,再加入洗涤液,重复3遍。目的在于去除未吸附的抗原,最后甩干。
3. 加待测血清：用血清稀释液倍比稀释待测血清，方法如下表：
每管取 0.1ml 分别加入到酶标板相应的 1~7 孔内。第 8 孔加入 0.1ml 健康人血清，作阴性对照。第 9 孔加入 0.1ml HBsAg 诊断血清，作阳性对照。酶标板置湿盒内， 37 ° C 孵育 30 分钟。
4. 洗涤：甩干酶标板中的液体，用洗涤液按照步骤 2 中的方法洗涤 3 遍，最后甩干。
5 ．加酶标二抗：将稀释好的酶标记羊抗人 IgG 抗体按每孔 0.1ml 加入 1~9 孔，第 10 孔仍只加 0.1ml pH7.4 磷酸缓冲液。酶标板置湿盒内， 37 ° C 孵育 30 分钟。
6. 洗涤：同步骤 4 。
7. 加底物显色：将新配制的邻苯二胺—— H 2 O 2 溶液按每孔 0.1ml 加到 1~10 孔中，置湿盒 37 ° C 孵育或室温静置 10~15 分钟。
8. 加终止剂一滴终止显色反应。
结果判定
第 10 孔为空白对照孔，无色，主要用于酶联免疫检测仪的调零。
第 9 孔为阳性对照，显棕黄色。
第 8 孔为阴性对照，无色（有时可因操作不精细或非特异性吸附而呈极浅的黄色）。
实验孔（ 1~7 孔）中结果阳性者，呈棕黄色。随着抗体量的递减，颜色也逐渐变浅。
效价孔的判定，以与阴性对照孔有显著性颜色差异的、血清稀释度最高的实验孔为效价孔，其血清稀释度即为所测抗体的效价。
注意事项：
1. 实验操作中，注意用于不同试剂的吸管、滴管不能混用，以免发生误差而出现假阴性或假阳性结果。
2. 邻苯二胺属有毒化学物质，要避免和皮肤接触。
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