一)、ABC法：
(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)
1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。
2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。
3. 无水酒精Ⅰ 30秒。
4. 无水酒精Ⅱ 30秒。
5. 95% 酒精Ⅰ 30秒。
6. 95%酒精Ⅱ 30秒。
7. 90%酒精 30秒。
8.80%酒精 30秒。
9. 70% 酒精 30秒。
10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10)
11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
12.水洗。
13.抗原修复。
14.PBS洗3次，1分钟/次。
15.加入血清孵育 20分钟。
16.摔干血清，加入一抗60分钟。
17.PBS洗3次，2分钟/次。
18.加入二抗孵育30分钟。
19.PBS 洗3次，2分钟/次。
20.加入ABC复合物，孵育30分钟。
21. PBS洗3次，2分钟/次。
22.DAB-H2O2 孵育切片5-10分钟。
23.PBS洗，水洗。
24.Harris苏木素染核5-10分钟。
25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。
(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)
1.切片脱蜡至水。
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
3.水洗。
4.抗原修复。
5.PBS洗3次，1分钟/次。
6. 加入血清孵育10分钟。
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。
8.PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。
9.PBS 洗3次，每次2分钟。
10.加入SP复合物孵育20-30分钟。
11.PBS洗3次，每次2分钟。
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris苏木素染核5-10分钟。
15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。
(三)真空负压LSAB法
1.切片脱蜡至水。
2. 0.3%H2O2甲醇真空负压处理5min.
3. 水洗。
4.如果需要，可进行抗原修复。
5.PBS洗3次，每次1分钟。
6.加入正常血清真空负压处理5min。
7.摔干血清，加入第一抗体，真空负压处理5分钟。
8. PBS洗3次，每次2分钟。
9. 加入二抗(即连接抗体)真空负压处理5分钟。
10.PBS洗3次，每次2分钟。
11.加入链卵蛋白复合物，真空负压处理 5分钟。
12.PBS 洗3次，每次2分钟。
13.DAB-H2O2孵育5-10分钟。
14.PBS洗，水洗。
15.染核，分化，蓝化，脱水，透明并封固。
注：真空负压即将真空干燥中抽成真空。负压达66.7KPa(500mmHg)
(四)Envision TM Systems.
1.切片脱蜡至水。
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
3.水洗。
4.抗原修复。
5.PBS 洗3次，每次1分钟。
6.加入一抗体孵育30-60分钟。
7.PBS洗3次，每次2分钟。
8.加入增强剂孵育20-30分钟。
9.PBS洗3次，每次2分钟。
10.加入酶标抗兔/鼠，复合物，孵育20-30分钟。
11.PBS洗3次，每次2分钟。
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris 苏木素染核5-10分钟。
15.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。
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