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细胞培养板的选择和使用问答-3

2020.9.14
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

我要用人纤连蛋白包被培养板养细胞,请问自己如何包被,有无其他方法可替代?
以10μg/μl的纤连蛋白(Fibronectin)于4℃包被培养板过夜,接种细胞就可以了。
我用罗氏的Fibronectin 1mg/瓶,说明书推荐:配成50ug/ml,包被用量5ug/平方厘米。室温下包被40分钟,然后吸掉多余溶液,注意培养板不能干掉,包被后立即使用,可用PBS冲洗,但没必要。具体浓度可根据实际需要调整(1~5ug/cm2)
(四)刀豆蛋白A包被:
问:我现在进行胰腺细胞培养,需要用刀豆蛋白A(Concanavalin A)包被细胞培养板。却不知如何使用。想请教各位:Con A用什麽溶液溶解、多大浓度、包被需要多长时间。
答:包被液:Buffer A 碳酸盐缓冲液(PH 9.5 0.05M),Na2CO3.10H2O 0.107g ,NaHCO3 0.073g ,二蒸H2O 25ml
包被液:10 ml+100ul2%NaN3+50ug抗原(5ug/ml)每孔100ul 。
(五)肝素化:
问:如何肝素化培养皿或细胞培养板,用于细胞与全血的共同培养 ?
答:用1250-2500 u/ml的肝素,湿润培养皿或板,然后倾去既可。
(六)病毒包被:
问:我要做间接ELISA检测抗体。要先把病毒包培养板,不知道怎么做!
答:我也没做过, 但我觉得病毒事实上也是蛋白颗粒,,在物理性质上与普通蛋白无异,因此我觉得就是一个普通蛋白的包板而已。用碳酸盐缓冲溶液。。4度过夜就行。。。,。。。
首先将病毒用包被缓冲液稀释成最佳浓度包被,四度冰箱过夜。次日用洗涤液洗涤3 次。再将一抗加入其中。最后加入酶标抗体。
最重要的一点,为防止病毒的扩散传播,一般事先都灭活才包被。
(七)anti-CD3单抗包被:
问:soluble anti-CD3单抗包被培养板时用PH9.6的碳酸盐缓冲液稀释,请问PH9.6的碳酸盐缓冲液的配方是什么。另外IL-2在培养体系中用U/ml和 ng/ml,请问这如何换算。
答:包被液(pH9.6碳酸盐缓冲液):精密称取碳酸钠 0.32g ,碳酸氢钠 0.586g ,加水溶解,定容至200ml。

U/m是细胞因子的活性单位,细胞因子作用于特定的靶细胞,影响靶细胞的生物活性或细胞增殖动力学,通过检测靶细胞的生物学活性或细胞增殖动力学变化,可间接反应细胞因子水平,所以生物学方法检测结果表示为相对单位或生物活性单位,一般是通过与细胞因子标准品的所测结果进行对照得出生物活性单位。而 ng/ml是一个浓度单位,是通过免疫学检测方法得到的一个定量结果,检测的是细胞因子以及与细胞因子有交叉抗原的细胞因子前体等,常用ELISA法,如多克隆抗体和单克隆抗体,识别不同表位两种单抗的双抗体夹心法。由于结构和功能的不一致性,以及其它因素干扰,免疫学测定法和生物学测定法结果并不等同,所以两种单位之间也是无法换算的。必要时,可同时进行检测。


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