Q5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题
A5.這個我不知道，但基本上是越快使用越好。由於包被的過程很快，所以我都是當天包被， 在等的過程中可以去做其他的事，包被即將完成的前20分鐘就開始處理細胞，等細胞收下來包被也就做好了， 馬上就用。
0.1%的明胶适合大多数细胞培养时的包被，在四度放置不会出现凝胶状。我参考的文献说内皮细胞用1％的明胶包被，也就是母液，它在四度放置时会适度凝结。我的内皮细胞用1％的明胶包被效果我觉得还不错。
不管你用包被1小时的方法还是包被4小时的方法，都最好从包被开始到使用的间隔不超过一天，包被的容器放置时间越长越不好。
(三)纤连蛋白（(Fibronectin， FN）包被：
因为课题需要，我要养人外周血来源内皮细胞，得先用human fibronectin包被培养板。但是昨晚我看了个通宵，把论坛里关于FN包被培养板的帖子大致浏览了一遍，反而越看越糊涂了——几乎就是百家争鸣的局面：
从稀释融解开始，有人说不能用三蒸水，要用制药用的纯水，否则PH值不对会影响活力；有人说用PBS，有人说用加了尿素的PBS；母液的浓度一般说是1mg/ml，但是买来的FN一般就是1mg，按这个浓度配置母液只能得到1ml，这么小的量如何分装啊？
至于包被的浓度，差异更是很大，有人说各个公司的产品不一样，还是以说明书上说的为准，是不是这样啊？
另外，包被的方法，有4度过夜的，有37度过夜的，有37度2至3个小时的，还有四度过夜或37度2至3个小时的……
我买的是ROCHE的1mg装human fibronectin，用的是corning的24孔板，最后对各种方案进行了摸索，结果见下面的帖子。
刚刚又再看了一下浓度的问题，大致归结为以下三种方案：
1.论坛里大部分战友用的还是50微克/毫升的浓度，室温或37度下放置30至40分钟。
2.我请教了有的人用的是10微克/毫升，4度过夜。
3.还有我见一篇文献《成人外周血内皮祖细胞分离和诱导分化》中南大学学报(医学版)J Cent South Univ (M ed Sci) 2005， 30 (5)上面写的是1微克/毫升，37度过夜。
至此产生一个疑问：是不是这几种方案都可行？浓度越高的，需要的温度就越低，时间就越短，而最后达到的效果是一样的？
如果真是这样，那么以上3个方案是一个比一个便宜啊，那我干脆用第3方案得了？第1方案比第3方案贵了五十倍啊！比第2方案也贵了五倍。
非得花那么多钱吗？FN不便宜啊！
各位战友，我摸索了好几次，总共试验了以下方案：
1.50ug/ml，4度过夜；
2.10ug/ml，4度过夜；
3.50ug/ml，室温下放置45分钟至一小时；
4.10ug/ml，37度过夜；
5.1ug/ml，37度过夜。
现在养到了第四天，自我感觉贴壁效果最好的是方案4，而且该方案所用的FN还是方案2用过一次的，我把它回收了又重复利用，已经经过了一次冻融，按理说效果应该下降了不少了，但是它的贴壁时间早，细胞多而且形态比较接近长梭形，还聚集形成了很多集落样的结构，如下图：
至于溶解分装，我是用灭菌注射用水1ml将其溶解为1mg/ml，然后分装为八支EP管，负二十度保存。
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