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培养细胞的活力测定(四唑盐比色法)

2020.9.15
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

培养细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用最广的技术手段之一。
任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成,从形态上区别死、活细胞是困难的。
方法:四唑盐(MTT)比色法
四唑盐(MTT)商品名为噻唑蓝
四唑盐比色法的原理:活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan(甲月替)量成正比。再用酶标仪测定OD值。
MTT法简单快速、准确,广泛应用于新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤放射敏感性实验等。
操作步骤
(1)100μL单细胞悬液接种于96孔板(5×104)。37℃、5%CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)
(2)加入2mg/ml的MTT液(50μL/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150μL/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570纳米)。记录结果,绘制。

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