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DNA显示和细胞有丝分裂相的观察

2020.9.15
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的RNA,核仁中也有少量的DNA。在线粒体,叶绿体等细胞器内除含有RNA外,也含有少量的DNA。

一、 目的与要求
了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞分裂各期的主要特点。
二、 原理
Feulgen反应的原理是根据DNA经弱酸(1mol/L)水解后,打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键,在脱氧核糖的一端形成有离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合,形成含醌基( )的化合物,醛基是一个发色团所以具有颜色,因此凡有DNA的部位,就呈现紫红色。
三、 实验内容
1.DNA的显示法-Feulgen反应
2.压片法
3.细胞有丝分裂相的观察
四、 实验步骤
(一) DNA的显示法-Feulgen反应
以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行Feulgen反应的具体操作程序如下:
切取根尖
↓ 长度0.3-0.5cm
Camoy固定剂
↓ 固定10-30分钟
95%酒精
↓ 10分钟
70%酒精
↓10分钟
蒸馏水 →(对照)5%三氯醋酸
↓ ↓90oC15分钟
1mol/L HCl← 蒸馏水
↓ 室温
1mol/L HCl
↓60 oC8分钟
Schiff试剂
↓40 -60分钟
亚硫酸水(1,2,3)
↓换3次,每次5分钟
自来水
↓将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料
蒸馏水

压片

镜检
(二) 压片法
压片的操作步骤如下,把根尖放在载片上,用刀片切取根尖(0.3cm),纵切根尖,加一滴水,用解剖针将根尖纵向分成若干小条,保留1-2小条,加盖玻片,用铅笔端轻轻敲击盖玻片,使细胞分离、压平呈云雾状。
(三) 蚕豆(或洋葱)根尖压片的观察
首先在低倍镜下,区分根尖的分生组织区及延长组织区的细胞,然后,在高倍镜下,观察细胞核的形态,注意在你的片子上,是否有有丝分裂细胞,如有,你能找到细胞分裂期的几个阶段,其特征如何?(可参照附录)
(四) 做Feulgen反应时,应注意的几个问题
(1) 固定剂的选择:一般常选用Carnoy固定液。其他的固定剂如Flemming固定剂及Champy固定剂等均可用,但不能使用Bouin固定剂。
(2) 水解时间:水解时间一定要合适,不宜过长或不足,否则会影响实验结果。如用Carnoy固定液固定的材料,水解时间一般在8-15分钟之间。水解时间的长短要随不同的材料及不同的固定剂而定。
(3) Schiff试剂的质量:在做Feulgen反应时,一个重要的成功因素就是Schiff试剂的质量问题。实验时,要注意试剂颜色是否正常、有无SO2的气味。
(4) 洗涤剂的重要性:漂洗时,所用的亚硫酸水,最好在每次实验前临时配制,以便保持较浓的SO2。
(5) 实验对照组:一定要做对照片,以便说明实验结果的真实性。
(6) 操作过程中,用镊子镊取根尖的生长区部位,切勿夹取根冠部位。
鸦片过程中尽量使根尖分生组织细胞保持原来的分布状态。
附录:植物细胞分裂的几个时期。
细胞周期分为间期及分裂期,分裂期又称有丝分裂期。
按照有无核膜,核仁、染色体,以及染色体形态与分布位置的变化,把细胞有丝分裂又分为前期、中期、后期和末期四个阶段。现将各期特点简述如下,
(1) 前期:此期明显得变化是染色质螺旋盘绕成一定数目的细而长的染色丝,此即为染色体。染色体先是分散于核液中,以后,逐渐向核膜移动,在此时,核仁逐渐消失,核膜溶解。
(2) 中期:中期明显得特征是染色体进一步盘绕。变短变粗,在细胞的中央规则地排列成行,此即赤道板,若仔细观察,可以看到染色体两侧的纺锤丝。
(3) 后期:此期明显得特征是相同的两组染色体分别向细胞两极移动,染色体达到两极时染色体紧缩成团,染色体的轮廓逐渐变得不清楚,细胞质中间部位出现一个模板。
(4) 末期:末期的变化正好和初期相反,原来盘绕变粗的染色体又伸展开,故核内又呈现为比较均匀。此时,核仁、核膜又重新出现。
此外,间期细胞的细胞核有下述特点:核膜清楚,核内结构均匀,除异染色质外,可见1-2个着色较深的核仁。而在进入细胞分裂期的细胞核,一般均大于间期细胞核。


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