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从全血采样、保存、运输到RNA纯化

2020.9.29
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空空

好好工作,天天开心

血液采集
    PAXgene系统提供标准化的BD Vacutainer(真空采血管,室温保存),配合使用一次性消毒采血针作静脉穿刺,采血管内的负压会迫使血液自动吸入管中,当搜集的血液达到2.5毫升刻度线时停止采血。采血管中本身已经预装了6.9毫升的RNA稳定试剂,拔出针头后只要将采血管轻轻颠倒8—10次将二者混匀即可。

样品保存和运输
    有许多实验需要从血液中提取RNA,这其中zui大的难题是RNA非常不稳定:研究表明在采血后的短短几个小时内RNA即迅速且显著降解,另外部分RNA在采血后受到诱导,表达增加。这种RNA降解和基因的体外诱导表达会导致在分析体内基因转录本丰度时出错,甚至低丰度的信息丢失。

    PAXgene系统中的采血管内预装的RNA稳定剂能够阻断RNA的降解以及防止体外诱导产生新的RNA转录本。混合后的血液样本可以在室温下稳定5天,在4度条件下稳定至少90天,方便样品的保存和运输。对于需要在不同时间或地点采样,背着液氮罐到处跑的研究人员来说,这是个好消息——不必担心降解而忙着作实验,可以等搜集一批样品再统一处理,提高工作效率,节约时间和精力。此前曾经介绍过的RNeasy Protect Kit 只适用于组织和培养细胞,不适用于全血,RNeasy Protect Bacteria Kit 只适用于细菌,现在这个PAXgene系统则是彻底解决全血的RNA保存和纯化的问题。

RNA纯化
    将保存的样品离心,前面提到的RNA稳定试剂包含裂解液,得到的核酸沉淀经过洗涤后重悬,加入含有蛋白酶K的裂解液进行彻底消化,离心除去剩余的杂质,上清加入乙醇后转入QIAGEN公司特别设计的RNA纯化柱,离心后RNA被吸附在特制的硅胶膜上,经洗涤出去杂质后即可用洗脱液将RNA洗脱,得到高纯度的RNA。可以用于包括定量RT—PCR、普通RT—PCR、NASBA、表达芯片分析、cDNA合成、核酶保护性分析、Northern Blot、mRNA筛选以及引物延伸等多种用途。


丁香通
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