先来说说为什么要用内参抗体?内参抗体的真的是必要的吗?
我举个例子,印度人和韩国人谁更富有?那还用说,当然是韩国人富有。
可是分明印度的GDP更高,为什么说韩国人更富有呢?
那怎样实现呢,如果我们能数一数细胞,不同的泳道上同样数量的细胞是最好的,可是这实现不了。这时候我们就需要一个大致能代表细胞数的参数。
而内参就起到这个作用,Histone H3.1、GAPDH、Actin、Tubulin这些蛋白通常在一个细胞里的表达量比较稳定,如果这些蛋白表达量一致,我们就认为不同泳道里上样量是一致的。
1.做WB根据目标蛋白分子量来选择对应的内参,一般目标蛋白与内参蛋白分子量差异15-30kD比较合适;
2.分子量差异太小不便于准确的裁切PVDF膜,差异太大转膜条件不一致;
3.我们分别提供17kD(P30266)、43kD(M20009)、55kD(M20005)的抗体供选择;
4.我们还有HSP70、HSP90蛋白抗体,在多种植物中检测过,但是目前还没有引用文献,