一文了解质谱确定磷酸化位点

　　电喷雾质谱仪为英国Micromass公司的电喷雾四极杆正交加速飞行时间串联质谱仪Q-TOF2。配备毛细管液相色谱和纳升喷雾源。镀金属钯的硼硅酸盐电喷雾针（palladiμm-coated borosilicate electrospray needle）(Protana, Odense, Denmark)是一次性使用的专用needle。碰撞气体为氩气。源温80C，锥孔电压50V左右。TOF 加速电压为9.1KV。MCP 检测器电压为2200V。当进行手动测序时，毛细管电压为800-1200V可得到稳定的喷雾。调节碰撞能量和碰撞气体的大小使得到一个好的串联质谱图。该质谱图经Micromass的专用软件MaxEnt3处理后，用Micromass的专用软件MasSeq直接推倒出肽段序列。Nanoflow probe进样毛细管电压为3000v。所有测定均在正离子方式下进行，用Glu-fib(sigma)的串联质谱碎片校正，质量准确度±0.2Da。。

　　中性丢失扫描：设定扫描范围400－2000，扫描方式为中性丢失扫描，寻找中性丢失49的双电荷离子。

　　基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪为Bruker公司的Autoflex，将样品溶于0.1%TFA中，取1μL与饱和CCA基质上清液混合，取1μL点在Scorce384靶上，送入离子源中进行检测。反射检测方式；飞行管长2.5m；氮激光器：波长337nm；加速电压25KV；检测电压1.6KV；反射电压23KV。校正用Peptide Calibration Standard(Bruker)。