液相色谱仪HPLC法测定蛋黄中胆固醇含量

鸡蛋营养丰富，含有蛋白质、脂肪、胆固醇、卵磷脂、维生素、铁、钙、钾等人体需要的矿物质。胆固醇又称胆甾醇。一种环戊烷多氢菲的衍生物。早在18世纪人们已从胆石中发现了胆固醇，1816年化学家本歇尔将这种具脂类性质的物质命名为胆固醇。胆 固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中zui为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙mi、氯仿等溶剂。胆 固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料。然而有研究人员提出，鸡蛋胆固醇含量相对较高，过多摄入鸡蛋会导致人体血清胆固醇增高，引发心血管疾病。由此我们对鸡蛋中胆固醇含量进行研究，探索快速检测鸡蛋中胆固醇含量的方法。

 实验部分

1.仪器与试剂

   仪器：Waters液相色谱仪waters 2695（配置高压泵，紫外检测器），万分之一梅特勒电子天平，涡旋混合仪，离心机，超声波清洗器 

   试剂： 胆固醇标准品，甲醇（色谱纯），异丙醇（分析纯），**（分析纯），石油醚（分析纯），无水乙醇（分析纯），市售普通鸡蛋

2. 色谱条件

    色谱柱：C18色谱柱 150mm×4.6mm×5μm；流动相：甲醇-异丙醇（4:1，v/v）；流速：1.0mL/min；温度：25℃； 进样量：20μL；检测波长：205nm。

3 .标准溶液配制

    准确称取胆固醇标准品25mg，于25ml容量瓶中，用无水乙醇溶解稀释至刻度，得胆固醇储备液（1.0g/L）。
    取胆固醇储备液0.0，0.5， 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，1.0ml于10ml容量瓶中，无水乙醇稀释定容，的浓度为0，0.05 ，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L 胆固醇标准溶液。

4 .样品前处理
  取鸡蛋称重，除去蛋清，准确称取蛋黄重量。取蛋黄样品2.0g，用20ml高纯水溶解稀释混匀，得蛋黄稀释液（0.1g/ml）。取蛋黄稀释液1.0ml于 具塞离心管中，加无水乙醇1.0ml，涡旋混匀，加乙mi3.0ml，石油醚3.0ml，涡旋混合，将混合液离心（4000r/min），使液体分层，取上 层有机相；下层再加入2.0ml**和2.0ml石油醚进行萃取，合并上层萃取液，氮吹仪吹干（温度<30℃），0.5ml乙醇溶解，经 0.45μm有机微孔滤膜过滤后，上机检测。

5.结果与讨论

6.标准工作曲线

    配制好的系列胆固醇标准溶液，在设定好的色谱条件下进行色谱分析，进样量为20μL，保留时间为6.72min，每个浓度标准溶液重复进样三次，以峰高H（mAU）为纵坐标，胆固醇标准溶液浓度C(g/L)为横坐标，绘制标准工作曲线，线性回归方程为H=76.45C-0.052，相关系数r=0.9991。

7.蛋黄中胆固醇含量

    将处理好的蛋黄样品取样测试，进样量20μL，在6.72min胆固醇被洗脱出来，蛋黄其他组分能与胆固醇有效分离，不干扰胆固醇的测定。由胆固醇标准曲线回归方程计算胆固醇含量。（液相图谱件见图1，结果见表1）

图1 蛋黄胆固醇液相图谱



表1 蛋黄胆固醇含量

8.结论

    本文建立了利用反相液相色谱法快速测定蛋黄中胆固醇的方法，样品无需皂化处理，直接用乙mi和石油醚进行萃取，大大节约了样品前处理时间，操作快速简便， 具有良好的准确度和重现性，可做为测定蛋黄中胆固醇含量的有效方法。另胆固醇主要来自人体自身合成，食物中的胆固醇是次要补充。一般常人每日从食物中摄取 胆固醇200mg，即可满足身体需要。专家建议每天摄入50mg-300mg胆固醇为佳。