植物蛋白互作技术
我们的世界物种多种多样，而与我们人类生存关系最密切的就是植物。随着时间的推移与科技的进步，人类在逐步揭示自身基因真相的同时，也在不断探寻植物基因的种种功能。其中，蛋白质是植物生命活动的主要承担者。因此，在植物学相关研究中，蛋白质之间的相互作用是研究的重要基础和手段。
目前，研究蛋白质-蛋白质相互作用常用方法主要包括：酵母双杂交技术 (Yeast Two-hybrid,
Y2H)、双分子荧光互补技术(Bimolecular Fluorescence Complementation,
BiFC)、免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation, CoIP)及荧光共振能量转移技术(Fluorescence
Resonance Energy Transfer, FRET)等，以及近几年来逐步应用到的萤火虫荧光素酶互补技术(Firefly
luciferase complementation
面对众多的技术，您是否也苦恼过，到底哪种技术更加适合我的实验呢？要选择哪些技术相互搭配才更加高效呢？面对这一连串的疑问，不要惊慌，今天小编准备了一篇技术简报，一起了解一下各类蛋白互作技术。
酵母双杂交技术(Y2H)：
酵母双杂交技术是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合）到酵母表达质粒的转录激活因子的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，通过2
个结构域的结合，从而调控目的基因的转录过程。这两个结构域分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream
activating sequence，UAS）的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。
优点：
① 操作简单，方便快捷，实验成本较低；
② 可快速、大量筛选蛋白互作组；
③ 灵敏度高，可检测存在于微弱或暂时蛋白相互作用。
缺点：
① 自身转录蛋白往往会造成假阳性的结果；
② 蛋白过量表达时对酵母产生毒性，使得酵母无法正常生长；
③ 无法检测细胞核外的蛋白互作。
双分子荧光互补技术(BiFC)：
双分子荧光互补技术本质上是一种蛋白质片段互补技术，是指将荧光蛋白多肽链切开并形成不发荧光的 N-和 C-末端2个多肽片段。当目标蛋白质相互作用时，2个片段重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，即可产生荧光。
优点：
① 灵敏度高，直观可视；
② 可以对在动物、植物和细菌等不同的宿主细胞中蛋白进行定位和互作强度分析；
③ YFP,RFP等荧光标记选择多样。
缺点：
① 对温度条件要求较高，温度越低，越有利于片段之间的互补；
② 有时2个不发光的荧光片段会发生自发融合的情况，出现假阳性的结果。
首页
