实验室中识破各种污染拯救细胞的方法

小伙伴们遇到过这种情况吗？

当您的课题进行到白热化程度时

却发现细胞被污染了

此时大家的心情可谓五味杂陈
 

形容一下就是

问君能有几多愁，眼泪恰似一江春水向东流

不过，别担心

逍鹏生物炼就火眼金睛

帮助大家识破各种污染，拯救您的细胞
 

我们先来看看污染的真面目，总结下来无非以下几种类型：
 

我们一起来分析它们的特征：
 

1真菌-深藏不露
 

真菌之所以深藏不露，是因为它们一般不会导致培养基变浑浊，所以在污染早期，很难发现它们的踪迹。直到长到一定规模后在镜下可观察到分叉细丝状的菌丝（有些呈管状，树枝状，串珠状的菌丝）（如图1，图2）。这类污染中，为首的污染代表是酵母菌：显微镜下常见成串的珠状物，形态呈卵形，大约比细胞小5~10倍，当其进行出芽生殖时，会聚集成连体结构；爆发污染严重时，会造成培养基pH值改变，不易除去。
 

图1. 真菌污染                                                 图2. 真菌污染
 

逍鹏生物可提供以下解决方案：
 

表1.产品列表

细菌-屡见不鲜
 

细菌种类繁多，分布广泛，是最容易污染细胞的微生物。
 

细菌在显微镜下呈黑色细沙状（如图3），典型特征是，可以使培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊。细胞形态会出现多角，多核状况；贴壁细胞不附着，停止生长甚至死亡。
 

图3. 细菌污染
 

逍鹏生物可提供以下解决方案如上表1：
 

3支原体-无孔不入
 

支原体之所以无孔不入是因为它们种类繁多，常以寄生或腐生营养方式生长，广泛存在于环境之中。
支原体是细胞培养过程中的常见污染，经常来源于实验人员（支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道）、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具。其大小只有0.15~0.3μm，所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法，0.22μm过滤膜。其污染特征不是很明显，增长速度相较于细菌比较缓慢，污染初期（轻微）培养基可能依然清澈不会变黄，所以轻微污染时不容易用常规方法（细胞外观观察或是DNA染色法）确认。

支原体会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应，它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌体实验结果偏差。

如下图所示：
 

图4. 支原体污染
 

逍鹏生物可提供：支原体检测/处理/预防全套解决方案。
01. 即用型细胞培养中支原体检测PCR试剂盒
 

检测结果如图：
 

大家可自行根据检测结果进行对比。

02. 支原体处理试剂
 

03. 支原体预防喷雾
 

支原体检测/处理/预防全套解决方案
 

表3. 产品列表
 

黑胶虫-神秘莫测
 

黑胶虫污染后，在镜下可看到密密麻麻的小黑点在培养基中自主游动。目前科学界对黑胶虫的身份并无定论。Dr.Cell 目前检测的黑胶虫样本，62%为细菌，38%为支原体。黑胶虫在镜下的典型特征呈卵圆状、球状、杆状等，具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。
 

点击进入公众号查看黑胶虫游动视频
 

逍鹏生物可提供以下解决方案：
 

使用三抗（货号：03-032-1B）结合支原体处理试剂（货号：03-036和03-037或03-038）有效清除实验室黑胶虫污染。
 

5病毒-专一任性
 

病毒之所以“专一任性”是因为其污染和传播具有细胞专一性，“钟情”到一辈子吊死在一颗“树”上。病毒污染可能来自宿主动物细胞或病人，在细胞培养污染物中是相对最难检测的。被病毒污染的细胞在显微镜下能明显观察到细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落等病态变形，严重时会在单层细胞上观察到局部破损空斑（如图5，图6）。

   图5. 感染之前                             图6. 感染24小时后

逍鹏生物提供的解决方案：选用辐照血清以杀灭病毒。

细胞交叉污染-玉石难分
 

细胞交叉污染之所以“玉石难分”是因为其长相和实验所养的目的细胞形态相似，难以分辨。对于细胞株的交叉污染，曾有文献报道统计，目前使用的细胞株大约有15~20%不是科学家们所认为的细胞，而在生物医药领域中，细胞来源和细胞株身份鉴定检测的观念是普遍缺乏的。
 

细胞株的交叉污染，常因不经意的实验疏忽（不同细胞株分盘时，共享一瓶培养基；枪头、移液管忘记更换，而造成不同细胞株之间的混合污染；实验操作人员录入错误细胞株名称；传代时的培养皿；冷冻细胞时的冻存管）而发生，继而造成后续数据搜集错误。
 

目前大部分的科学期刊都已有“细胞相关实验论文发表前，均需附上细胞鉴定报告”的规定（可查阅：文章发表前要求提供细胞鉴定的杂志），以此保证数据来源的正确性。
 

那么如何鉴别呢？细胞身份验证方式：短串联重复序列（STR）、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前国际细胞库（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于细胞株身份鉴定方法。