维生素D、吸烟、EB病毒与多发性硬化症患者长期认知状态相关性分析
认知障碍是多发性硬化症（MS）的一种常见症状，严重影响患者的生活质量。由于没有既定的治疗方法，寻找预防或减缓认知能力下降的可变因素尤为重要。低水平维生素D、吸烟和抗人类疱疹病毒（EBV）核抗原1（EBNA-1）的抗体升高是目前已知的几种MS风险因子。然而，关于这些MS风险因子能否明确预测MS患者的长期认知状态，目前尚未进行过较为深入的探讨。
来自美国哈佛大学公共卫生学院的科学家们探究了维生素D、吸烟和抗EBNA-1抗体浓度是否能预测MS患者的长期认知状态和神经元损伤。
本研究利用Simoa（Single Molecular
Array）技术对神经轴突损伤标志物进行定量检测。Simoa技术是由美国Quanterix公司研发生产的一款超高灵敏度单分子蛋白质检测技术，其灵敏度为传统ELISA技术的1000倍以上，检测下限达到fg/mL，为血清/血浆中实时监控这些标志物提供了技术支撑，改变了脑损伤和神经退行性疾病的诊断方式。
First published April 16, 2020
发表期刊：Neurology；IF=8.689
原文链接：https://n.neurology.org/content/94/18/e1950.long
研究背景
该研究团队之前报道过在接受了临床BENEFIT治疗（使用Betaferon/Betaseron用于新发MS的初始治疗）的患者中，治疗后1或2年内维生素D水平较高的患者在后续的5年随访中活动性病变和脑萎缩的发生率较低。
在本研究中，研究人员将随访时间延长至11年，并在复发缓解性MS首次复发早期探讨维生素D、吸烟和抗EBNA -1抗体是否有助于预测独立于疾病治疗的长期认知功能和神经轴突完整性。本研究采用盲法随访5年，随后观察至8.7年，然后在第11年进行评估，以评估早期治疗的长期效果。
样本
BENEFIT（clinicaltrials.gov:
NCT00185211）是一个多中心双盲三期临床试验（早期治疗组和延迟治疗组），这项实验包括468名接受了干扰素β-1b（INFβ-1b）治疗，且首次临床发作提示MS的临床孤立综合征患者（CIS）。本研究是在完成11年持续治疗的278名患者中进行的（BENEFIT11:NCT01795872）。第11年进行评估时,
这278名患者中有61.5%接受了疾病缓解治疗。
研究方法
一、血清中维生素D、吸烟和EBV感染相关生物标志物的检测
在基线期和第6、12和24个月收集血清并检测所有生物标志物，此外还检测第54个月、第60个月以及第11年采集的血清中的维生素D。
1. 25-羟基维生素D （25（OH）D）是维生素D营养状态的首选生物标志物，本研究对25（OH）D进行检测，针对前24个月收集的样本，采用ELISA方法进行分析；24个月之后收集的样本采用化学发光免疫分析法进行分析。
2. 采用ELISA方法对抗EBNA-1的免疫球蛋白G （IgG）水平进行了定量，作为过去EBV感染史的检测；如果EBNA-1抗体呈阴性，对病毒衣壳抗原(VCA)的IgG进行定量，来作为急性感染EBV的检测。
3. 尼古丁代谢物可替宁是当前或近期使用烟草的生物标记物，与吸烟数量相关，该研究也是采用ELISA对可替宁进行检测。通常吸烟者体内可替宁>25ng/mL，而非吸烟者低于10 ng/mL。
二、认知功能与神经元完整性研究
认知功能通过同步听觉系列加法测验（PASAT）进行评估。PASAT是一种针对认知功能的评估方式，主要通过测试听觉信息处理的速度和灵活性，以及计算能力，最后通过测试分数反映受试者的认知功能状态。
该研究使用Simoa法，以第1年和第11年为基线，测定了36个血清样本的神经丝轻链蛋白（NfL）浓度。血清NfL是神经轴突损伤的生物标志物，与脑脊液NfL密切相关。
根据性别、基线年龄、治疗分配、类固醇治疗、多灶症状、T2病变和体质指数（BMI）调整线性和logistic回归模型。
结论
25(OH)D较高的患者BMI较低，基线T2病变较少；抗EBNA
-1滴度较高的个体和吸烟者中男性比例较高。13.8%的受试者从基线到第11年间服用维生素D补充剂。基线期NfL和第一年的NfL均与第11年的PASAT无关。与基线相比，第一年的NfL与第11年的NfL的相关性更强（表1）。
表1：278名参与者的基线特征:在前24个月内平均25(OH)D的五分位数，基线EBNA-1 IgG抗体滴度的四分位数，以及基线可替宁水平
一、长期认知功能研究
1. CIS发生后的前几年里，体内25(OH)D较高的患者在第11年PASAT测试中的得分低于中位数的可能性较小。（如图）
Figure. 根据症状出现后24个月和60个月内平均25(OH)D五分位数，临床分离综合征11年后PASAT(中位得分56分或以下)认知能力较差的比值比(OR)和95%置信区间(CIs)
2. 在线性模型中，吸烟者往往具有长期认知能力较差的表现，对应于临床意义上的PASAT的5.4点，且在重度吸烟者的患者中最为明显（表2）。
表2：CIS后11年PASAT评估血清可替宁水平(吸烟的生物标志物)和长期认知能力
二、长期神经轴突完整性研究
长期神经完整性与长期认知表现存在联系。前24个月或60个月25(OH)D平均水平升高50 nmol/L与血清NfL降低20%相关，表明第11年神经轴突损伤更少（表4）。此外，在发病后24个月内吸烟与第11年时NfL升高20%有关（表4）。
表4：CIS患者血清NfL浓度测定血清25-羟基维生素D (25(OH)D)、可替宁和EBNA-1抗体水平和长期神经轴突损伤
小结
根据PASAT的评估，临床MS发病后较高的25(OH)D水平预示着更好的认知功能，而在病程11年后较低的NfL水平则预示着充足的维生素D水平可能有助于MS患者的长期神经保护。与不吸烟者相比，吸烟者在PASAT测试中的长期认知得分更低，而在NfL中得分更高。相比之下，EBV血清学标记物不能预测认知表现或NfL浓度。
本研究的结论更一步证实了NfL可能是临床MS研究的一个有效的生物标志物。
综上所述，临床MS发病后较低的维生素D水平和吸烟预示了MS患者长期认知功能和神经元完整性较差；提示临床多发性硬化症发病后纠正维生素D不足和戒烟可保护长期认知功能和中枢神经系统的完整性。
因此可以在CIS和MS患者中常规考虑补充维生素D，特别是那些维生素D水平不足的患者，鼓励和帮助病人戒烟仍然至关重要。
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