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新冠病毒核酸检测PCR技术知识点梳理(一)

2021.3.08
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

近日,由于全国复工复产复学的大量需求,阿里健康、美团App 等线上平台联合各大第三方检测机构,陆续开放了线上预约新冠病毒核酸检测服务。

 

开通服务的地区,人们可以拿起手机即可便捷的预约核酸检测,最快24小时即可拿到结果。如此便捷的服务,让广大民众欢欣鼓舞,科技的发展又一次为人们的生活带来翻天覆地的变化。

 

谈技术之前,咱们先说点国计民生重要的事情:

 

根据国家药品监督管理局官网数据查询信息,国内已有19个新冠病毒核酸检测产品取得医疗器械注册证书,如下图。

 

广大医疗机构及百姓做核酸检测的时候,请一定要认准这些合法的产品和企业!

 


 

而浏览完上表,我们会发现,大部分的新冠病毒核酸检测试剂盒的原理都是基于荧光PCR法,对于一直活跃在科研圈的工作者,自然对鼎鼎大名的PCR技术不陌生,那么荧光PCR、qPCR、RT-PCR等等各种PCR技术,您分得清吗?是不是还在犯迷糊呢?

 

今天,小艾就带你区分区分,梳理一下分子诊断领域的“杠把子”-PCR技术:

 

PCR,也就是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅扩增,放大,用于后续的检测和基因比对。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。

 


 

PCR由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。所有的各种PCR都是在此基础上发展出来的,比如荧光PCR、qPCR、RT-QPCR等。

 

什么是荧光PCR?

 

荧光PCR技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。该技术具有实时监测、快速、灵敏、精确等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。

 

荧光PCR法根据化学发光原理可以分为染料法和探针法,它们的区别是什么呢?

 

1.染料法:可用的染料有SYBR®Green I 、SolisGreen® 等;染料能够与DNA双链结合,当PCR扩增的时候,染料结合到DNA上,从而发光,单个的染料不发光,这样就能收集到信号。

 

 

2.探针法:TaqMan 探针法即除了引物外另外设置一个探针,在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团,这个时候,两个平衡不发光,但是当DNA通过引物合成的时候,探针被折断,释放出发光基团和淬灭基团,两个距离较远,发光基团产生荧光,被机器收集到信号,从而检测到基因的量。

 

 

根据扩增策略和检测产物手段的不同,PCR又可分为定性PCR和定量PCR。这里主要说一说定量PCR。


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