通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠，收集脾细胞，并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示：在C57BL/6小鼠T细胞表面检测到mTNFR2，在B-hTNFR2纯合鼠T细胞表面检测到hTNFR2。
通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠，收集脾细胞，并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示：在C57BL/6小鼠Treg细胞表面检测到mTNFR2，在B-hTNFR2纯合鼠Treg细胞表面检测到hTNFR2。
B-hTNFR2小鼠的白细胞亚群分析
从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。
结果表明，纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影响T，B，NK，粒细胞，单核细胞，DC和巨噬细胞的分化。
从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。结果表明，纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。
从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分离出淋巴结细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。结果表明，纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影响T，B，NK细胞的分化。
从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分离出淋巴结细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。结果表明，纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。
TNFR2抗体与B-hTNFR2纯合鼠T细胞结合分析
从B-hTNFR2小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试TNFR2抗体与脾细胞的结合。
从anti-mCD3ε(0.2或1μg/mL)和anti-mCD28(1μg/mL)体内刺激的B-hTNFR2小鼠分离出脾细胞。单个活细胞用CD45圈门后用于进一步的分析。如图所示，与同型对照抗体(hIgG)相比，hTNFR2 Ab2与B-hTNFR2纯合鼠的T细胞是结合的。在anti-mCD3ε(0.2μg /mL)刺激条件下，mTNFα增强了hTNFR2 Ab2与B-hTNFR2纯合鼠的T细胞结合，这表明mTNFα/hTNFR2信号通路在B-hTNFR2纯合鼠中是可行的。
TNFR2抗体药效验证
将鼠结肠癌MC38细胞皮下植入纯合的B-hTNFR2小鼠中，当肿瘤体积达到约100 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗人类TNFR2抗体进行治疗。与对照组相比，两种人TNFR2抗体以不同程度抑制肿瘤生长，证实B-hTNFR2小鼠模型是体内TNFR2抗体药理功效研究的有力工具。（A）肿瘤平均体积±SEM，（B）小鼠平均体重±SEM。
参考资料
[1]Faustman D, Davis M. TNF receptor 2 pathway: drug target for autoimmune diseases. Nat Rev Drug Discov 2010, 9(6): 482-493.
[2]Torrey H, Butterworth J, Mera T, Okubo Y, Wang L, Baum D, et al. Targeting TNFR2 with antagonistic antibodies inhibits proliferation of ovarian cancer cells and tumor-associated Tregs. Sci Signal 2017, 10(462).
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