血液常规检测中的重要参数——网织红细胞

网织红细胞计数是用作红细胞产生或红细胞生成的指标，是诊断或监测贫血治疗最常用的临床指标。流式细胞术测量网织红细胞不但大大提高了网织红细胞计数的准确性和精确性，还能提供一些反映网织红细胞成熟度和大小的非传统参数。临床研究已经开始将这些非传统参数应用于许多贫血性疾病的诊断和治疗。

近年来，许多中、高端血细胞分析仪都配有自动的网织红细胞分析功能。网织红细胞的全自动血液分析过程消除了手工涂片、染色和不同技师引起的偏差，可使实验更标准化。此外，同手工方法计数1000个细胞相比，自动的网织红细胞分析法分析30000个细胞，大大提高了分析结果的准确性。

1. 在流式通道中，运用VCS三维技术分析染色后的网织红细胞：低频波检测细胞体积，网织红细胞比成熟红细胞稍大；高频波检测细胞的内部成分，可剔除非红细胞；激光散射将网织红细胞与成熟红细胞区分开来，因为网织红细胞胞浆含嗜碱性物质，结合染料后散射较多的激光，在散点图上分布于红细胞的右侧，网织红细胞成熟度越差,在散点图上分布越靠右。

2.VCS技术

细胞经染色和漂洗后，采用一种独特的流式细胞术计数细胞，同时采用体积、传导性和光散射三维分析来确定网织红细胞。体积检测用于确定成熟红细胞和网织红细胞的大小。体积的信息对于区分网织红细胞非常重要，根据定义，未成熟的红细胞大于成熟的红细胞。

传导性或射频测量提供细胞的内部特性信息， 用于区分体积较小的白细胞。

3.散点图和轮廓图形分析

从体积、传导性和光散射收集的原始资料反映在三维散点图上。用曲线分离细胞群后，血小板和白细胞被区分，只留下成熟红细胞和网织红细胞作进一步分析。轮廓图形分析以一种非线性的方式将网织红细胞从成熟红细胞中区分出来，这种非线性方式是沿着细胞群的曲线而不是直线。

4．网织红细胞参数

血细胞分析系统中显示的网织红细胞参数是用作判断仪器故障的工具，并有助于对散点图进行解释。

根据直方图显示的256通道中的体积，传导性和光散射的分析，可以得到每个细胞群落的相关信息。平均通道值决定了每个细胞群落在散点图中的实际位置。此外，通过计算得出的标准差决定了每个细胞群落每次检测的差异程度。平均通道值和标准差都会受到仪器状态、增益调节、试剂的影响，或者和某些特定的病人样本相关。

5．网织红细胞报警

利用复杂的演算，定位参数结合其他细胞群的统计保证结果的完整性并同时给出网织红细胞报警信息。某些临床疾病会导致散点图与已知的成熟红细胞和网织红细胞群不相符。这些不典型的细胞群产生的确认网织红细胞或异常网织红细胞信息以此来提示实验室需要进行进一步复查。

6．轮廓图形分析技术过程

可观察到一个有高光散射的细胞群落，它们的体积均值比网织红细胞更接近于成熟红细胞。这群细胞所具有的高光散射的特性与地中海贫血中常见的未完全溶血（影细胞）的红细胞一致。这个细胞群可能会因为疾病的异源性和病人的状况不同变得不明显或非常显著。镰状细胞标本中红细胞的形状和大小多样，其网织红细胞和成熟红细胞的体积均值和标准差均会升高。这个细胞群可能会因为疾病的异源性和病人的状况不同变得不明显或非常显著。           

在散点图中，可观察到一个大体积的细胞颗粒群，它们的光散射均值比网织红细胞更接近白细胞。已经发现这群细胞是小体积白细胞群延续出的一部分，可能是碎片或破碎的白细胞。

7．网织红细胞的相关参数

贝克曼库尔特通过自动的网织红细胞分析和流式细胞术测量光散射为网织红细胞群提供了更多的细节。网织红细胞群可进一步被分成10个成熟度。含有最多RNA的网织红细胞位于最强光散射区，3到10区。

此外，VCS技术测量网织红细胞还可得出以下参数：网织红细胞百分比（RET%）和网织红细胞绝对值（RET#），未成熟网织红细胞指数（Immature Reticulocyte Fraction, IRF），平均网织红细胞体积（ Mean Reticulocyte Volume, MRV），平均球形细胞体积（Mean Sphered Cell Volume, MSCV），和高光散射网织红细胞参数（High Light Scatter Reticulocyte, HLR% & HLR#）。

8. 未成熟网织红细胞指数 （IRF）

定义为幼稚的或未成熟的网织红细胞与总的网织红细胞的比值。未成熟的网织红细胞较大，按照光散射分类就是那些有最强光散射特性，即最多RNA的网织红细胞。

9. IRF的临床应用

正常情况下IRF占网织红细胞总数的不足5%。未成熟网织红细胞在大量的促红细胞生成素的刺激下会释放到外周血中，如出血，某些贫血或对刺激骨髓造血治疗的反应。IRF类似于中性粒细胞的核左移，能够提供额外的红细胞信息，这些信息可以缩短疾病从诊断到治疗或单纯的治疗时间。

大量文献已表明，IRF结合网织红细胞计数可提高贫血分类，监测骨髓恢复及贫血治疗情况。

近年来先进的技术为临床医生提供了更精确的网织红细胞计数和更有价值的新的网织红细胞参数。最有前景的一个新参数是未成熟网织红细胞指数，它在指导临床实践方面具有实用的临床意义。此外，MSCV和MCV的相关性在提示遗传性球形红细胞增多症方面有重要的意义。