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核酸扩增引物设计的要求

2021.5.12
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事，把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

　　1、避免重复碱基，尤其是G。

　　2、引物退火温度Tm控制在58～60℃。

　　3、G+C为30%～80%。

　　4、3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C。

　　5、正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。

　　6、扩增产物长度不能太大，一般在80～250 bp，80～150bp最为合适。

　　7、要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。而且引物设计时应考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力，即引物应跨内含子，这样可以更有效地不受基因组DNA污染的影响。

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