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放射免疫分析的原理(三)

2021.5.13
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  RIA法的影响因素

  pH和离子强度;反应温度,温度一般为37℃,也有45℃,室温,4℃ 冰箱;反应时间,操作中的注意事项:戴手套、防护镜等,将试剂盒从冰箱中取出,室温下放置30 min方可使用。

  (1)编号:第一排是标准管:根据标准品浓度由低到高A,B,C,D,E,F,G……;第二排是被测样品1,2,3,4,5,6,……。

  (2)加样要准确,移液器的使用(两个档位,一档吸人,二档排出)吸头(一个标本一个吸头,避免互相污染)。加试剂:先看瓶签,再摇匀,最后吸人。(标记物一般为红色,一抗为兰色)。

  (3)温育时间要保证:按说明书中所要求的时间温育,可以延长,不能缩短。

  (4)分离剂加入:混匀静置时间,可以延长,不能缩短。保证抗原抗体复合物与第二抗体的充分结合。

  (5)温度:注意观察水浴箱的水温,误差不能太大,为±1℃ ,室温21℃左右。

  (6)离心时间:也应按说明书中所要求来操作,转速一般为3 500r/min。往离心机里放反应管时,尽量让它直立(因为倾斜可能会使液体流出)。吸上清液时,沉淀物在试管底部,真空泵的吸头头部不能直接插人到试管底部中央(会吸走沉淀物,而我们的目的是分离保留沉淀物),应该使吸头贴着试管管壁往下放,并且试管要稍微倾斜,但要在即将插到沉淀物边缘时停止,快速上升取出。少留一点点上清液也可。主要是保证沉淀物完整。

  (7)进人免疫计数器测量时,注意观察做出的曲线好坏:是不是需要修改,剔除坏点。

  (8)报结果:碰到异常结果,要再次看一看沉淀物是否都在,患者情况如何,结果是否与患者情况相符,方可报出。非竞争性RIA法中,清洗固相包被珠时,清洗次数要严格按说明书中所要求来操作,不得减少。虽然RIA法的影响因素很多,但操作中只要注意上述事项,RIA法的稳定性还是相当不错的。主要是它存在放射污染,这个问题不易解决,影响了它以后的发展,如今电化学发光免疫分析,化学发光免疫分析,酶联免疫分析,磁酶免疫分析等相继推出,发展很快。RIA法将被淘汰。

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