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肺炎链球菌微生物学检查

2021.5.17
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

肺炎链球菌为链球菌科的一种球状细菌﹐革兰氏染色阳性﹐常成对或成短链排列﹐故旧称肺炎双球菌(Diplococcus pneumoniae )。

    无芽孢﹐无鞭毛﹐有明显荚膜。在血琼脂培养基中生长良好﹐菌落外围有绿色溶血带﹐在胆汁中溶解﹐对小鼠致病﹐可藉此与甲型溶血性链球菌鉴别。有荚膜的肺炎球菌形成光滑型菌落﹐毒力强﹔失去荚膜后变为粗糙型菌落﹐毒力降低或消失。
 

    肺炎链球菌抵抗力不强﹐加热至52℃10分钟或阳光直射1小时即可杀死﹐对一般消毒药如石炭酸﹑高锰酸钾均较敏感﹐对干燥抵抗力较强﹐在干燥的痰中可生存1~2个月。
 

    发病机理和病理 
 

    肺炎链球菌为正常人鼻咽部的常住菌﹐尤其在冬春季节﹐健康人鼻咽部常可培养出肺炎链球菌。
 

    因正常人呼吸道有多种防止肺部感染的保护机制如咳嗽反射﹑纤毛运动﹑巨噬细胞吞噬作用等﹐故一般肺炎链球菌并不引起发病。仅当进入气道的细菌数量太大﹐或呼吸道正常防御功能遭受损害时才引起发病。
 

    致病物质
 

    (1)荚膜:是肺炎链球菌主要的致病因素。有荚膜的肺炎球菌可抵抗吞噬细胞的吞噬,有利于细菌在宿主体 内定居并繁殖。 
 

    (2)肺炎链球菌溶血素:高浓度时对实验动物有致死性。对人的致病机制尚待确定。
 

    (3)紫癜形成因子:注入家兔皮内,可产生紫癜及出血点并伴有 内脏出血。紫癜形成因子与人类肺炎球菌感染间的关系尚不明确。
 

    (4)神经氨酸酶:在新分离株中发现,能分解细胞膜糖蛋白和糖脂的N-乙酰神经氨酸,与肺炎链球菌在鼻咽部和支气管黏膜上定植、繁殖和扩散有关。
 

    临床表现
 

    约半数肺炎病例发病前有感冒症状﹐很快出现寒战﹑咳嗽﹑胸痛和血痰等症状。体温在数小时内上升至39~40℃﹐呈稽留热型(持续高热﹐24小时内温差<1℃)﹐常伴头痛﹑乏力和全身肌肉酸痛等症﹐60~80%患者因炎症波及胸膜而出现严重胸痛﹐胸痛随呼吸和咳嗽而加重﹐若病变在下叶﹐炎症波及横膈﹐可发生腹痛﹐甚至误诊为急腹症。
 

    90%病例有咳嗽﹐初为干咳﹐继之咳少量黏液﹐以后呈脓性痰﹐约3/4病例痰中带血或呈铁锈色(渗出到肺泡内的红细胞破坏释出含铁血黄素混于痰中而致)。1/3成人或2/3儿童于病程早期有消化道症状如恶心﹑呕吐﹑腹胀﹑腹泻等。
 

    肺炎链球菌脑膜炎为成人常见的化脓性脑膜炎﹐常继发于肺炎﹑中耳炎﹑乳突炎﹑鼻窦炎或颅脑损伤后﹐一部分病例无原发病灶可寻。半数以上病例伴有菌血症或败血症﹐病情大多危重﹐全身毒血症状明显﹐有头痛﹑发热﹑神志改变和颈强直与克尔尼格氏征﹑布鲁金斯基氏征阳性等脑膜刺激征。
 

    诊断 对原因不明的突发寒战﹑高热伴呼吸道症状者应考虑肺炎链球菌肺炎的可能。X射线胸片检查常能明确诊断。痰涂片革兰氏染色见阳性成对球菌﹐痰﹑血液或脑脊液等体液细菌培养获肺炎链球菌则可确诊。
 

    微生物学检查
 

    1、标本根据感染部位不同采取不同标本,如痰液、脓液、血液、脑脊液等。
 

    2、直接涂片镜检对痰、脓或脑脊液沉淀物标本,可涂片进行革兰染色镜检,若发现典型的成双排列、有荚膜的革兰阳性球菌,结合临床症状可做初步诊断。
 

    3、分离培养与鉴定将痰或脓液直接接种于血琼脂平板上,37℃孵育24h后,挑选溶血的可疑菌落做进一步鉴定。血液及脑脊液先在血清肉汤培养基中增菌后,接种到血琼脂平板上分离培养并鉴定。
 

    4、肺炎链球菌的鉴定主要应与甲型溶血性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、菊糖发酵和奥普托辛试验最为常用。必要时可做小鼠毒力试验。在上述试验中,肺炎链球菌均为阳性,而 甲型溶血性链球菌为阴性。
 

    5、肺炎链球菌型别鉴定
 

    (1)荚膜肿胀试验:亦称为Quellug试验。新鲜标本悬液与等量不稀释的肺炎球菌分型诊断血清混合后,覆以盖玻片,油镜下观察。标本中肺炎球菌若与同型免疫血清相遇,荚膜将显著增大。 
 

    (2)凝集试验:将可疑肺炎球菌与已知标准分型血清做玻片凝集试验,若细菌凝集成堆,为同型肺炎球菌。
 

    预防
 

    目前有的国家采用14价肺炎链球菌荚膜多糖体菌苗进行免疫预防﹐有效率为50~100%。对肺炎链球菌高风险人群如已行脾切除术者或2岁以上原有心﹑肾﹑肝或代谢病患者行菌苗接种时﹐相应类型的肺炎链球菌引起肺炎合并菌血症的发病率大约减少80%﹐故菌苗不失为保护患者免于肺炎链球菌感染的主要方法。


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