3.2 国外献血员中NAT检测结果
从各国公布的NAT检出的阳性标本资料总结中可以看出,尽管世界发达国家的血液安全水平已经大幅度提高,但是由于EIA“窗口期”所致的漏检概率仍然有几百万分之一、几十万分之一甚至几万分之一，具体检测结果见表2。
表2 国外献血员中NAT检测结果汇总
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国家 |
试剂 |
检测方式 |
血清学阴性、NAT单独阳性检出情况 |
文献 |
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美国 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; Roche Cobas AmpliScreen HIV-1 and HCV tests |
Chiron: 16人份，TMA, 化学发光检测； Roche：24人份混合，PCR-ELISA |
1999.03-2002.03: HCV NAT+：170/39,721,404，即1/ 23万； HIV-1 NAT+：12/37,164,054，即1/310万 |
文献14 |
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日本 |
Multiplex HBV/HCV/HIV-1 reagent( Roche 与日本共同研制) |
1999年7月1日-2000年1月31日，500人份； 2002年2月1日起，50人份混样; 合格血液检测 |
1999.7–2000.4： HBV NAT+ ：26／2560977，即1/9.8万； HCV NAT+ ：9／2560977,即1/28.4万； HIV-1 NAT+：0／256.1万。 2000.2.1–2002.12.31： HBV NAT+：308 ／16012175，即1/5.2万； HCV NAT+：46 ／16012175,即1/34.8万； HIV-1 NAT+：6／16012175，即1/266.9万 |
文献15,16 |
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澳大利亚 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
2个点单人份，3个点16人份，TMA, 化学发光检测； |
2000.06.07-2004.11.14： HCV NAT+-：9/4,489,550，即1/49.9万； HIV-1 NAT+：1/4,489,5504，即1/449.0万4,489,550 |
文献17及个人交流（文献18） |
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中欧 |
HCV PCR: Roche Cobas Amplicon; HIV PCR: 自己研制的PCR |
96人份混合 |
HCV NAT+：6/360万，1/60万；HIV NAT+：2/360万，1/180万 |
文献19 |
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法国 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV；或Roche Cobas Ampliscreen HIV-1 and HCV结合the Organon Nuclisens 核酸提取仪 |
单检，或8人份，或16人份,不考虑血清学 |
2001.07-2003.12： HCV NAT+：3/614万，即1/205万；HIV NAT+：2/614万，即1/307万 |
文献20 |
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新加坡 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
单人份检测 |
2000.10-2004.10: HCV NAT+：4／304,715,即1/7.6万； HIV-1 NAT+：0／304,715，即0/30.5万 |
个人交流（文献21） |
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韩国 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
16人份 |
2004.06.14-2004.12.03，前期评估： 单采献浆者24599，献血者15597: HCV NAT+：1/40196； HIV NAT阳性：1/40196； 2005.01.01起，常规检测 |
个人交流（文献22） |
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南非 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
单人份 |
1999年: HIV NAT+: 2/19709,即1/1.0万；HCV NAT＋: 0/19709 |
文献23 |
3.3我国核酸筛查技术应用研究情况
3.3.1 我国核酸筛查技术应用
我国有关NAT血液筛检研究的报道还比较少见。比较规范的血液筛检研究更少，有的单位利用国产PCR试剂加电泳检测的方法进行检测，其实验室交叉污染的问题很难控制。有关我国献血者及原料浆中NAT检测工作的情况总结于表3和表4。
表3 国内血液中心开展NAT检测研究的情况
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单位 |
试剂 |
检测方式 |
NAT阳性 |
文献 |
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深圳保安区中心血站 |
美国Biotronics Tech HBV,HCV AmpliSensor试剂盒 |
20人份混合15000rpm离心浓缩，半自动荧光定量PCR检测 |
HCV NAT+: 1/8805 (ALT 390U/L)； HBV NAT+: 抗-HBc阳性中：1/946；单项抗-HBc阳性中：5/495(1％) |
文献24 |
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厦门血液中心 |
自行设计引物，HCV |
50人份混合，NucliSensExtractor 提取核酸，NASBA技术，混扩增，ECL 检测 |
HCV NAT+: 2/10000,即 1／5000 |
文献25 |
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江苏省血液中心 |
华美HCV RNA试剂盒 |
单人份，PCR,电泳 |
HCV NAT+: 2/750，即1／375 |
文献26 |
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上海血液中心 |
美国Chiron Procleix HIV-1/HCV |
8人份或24 人份混合；TMA技术；化学发光检测 |
HCV NAT+: 0／103539; HIV NAT+: 0／103539; |
文献7 |
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北京血液中心 |
匹基HCV/HIV-1 荧光PCR核酸检测试剂 |
24人份混合，26000g离心浓缩，Roche核酸提取柱，荧光PCR |
HCV NAT+: 0/34373; HIV NAT+: 0/34373 |
文献27 |
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多单位参加的国际合作 |
美国Chiron Procleix HIV/HCV |
16 人份混合；无菌采血管EDTA抗凝，TEAN自动混样；TMA技术；化学发光检测 |
HCV NAT+：2 /80259 (其中1个ALT 254 IU/ml) HIV NAT +：0/80259 |
文献28 |
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深圳血液中心 |
Roche Ampliscreen HBV/HCV/HIV |
24人份混合，STAR2000自动混样;Roche MPLC自动提取 核酸； Roche COBAS Amplicor 扩增和检测 |
HCV NAT+: 0/16512; HIV NAT+: 0/16512; HBV NAT+: 8/16512,即1/2064 |
文献29及个人交流(深圳血液中心,王良华，2005年５月) |
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沈阳血液中心 |
匹基HCV 荧光PCR核酸检测试剂 |
24人份混合，26000g离心浓缩，Roche核酸提取柱，荧光PCR |
HCV NAT+: 0/8.3万 |
个人交流(沈阳血液中心，李剑平博士，2005年6月) |
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中山中心血站及芜湖中心血站 |
厦门长城，无锡三星，上海正业 HCV PCR |
单人份，PCR,电泳 |
HCV NAT+: 77/28098(1/365) |
文献30 |
表4 国内原料浆开展NAT检测研究情况
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单位 |
试剂 |
检测方式 |
NAT阳性 |
文献 |
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中国药品生物制品检定所 |
匹基HCV/HIV-1 荧光PCR核酸检测试剂 |
24人份混合，26000g离心浓缩，Roche核酸提取柱，荧光PCR |
HCV NAT+: 0/19196; HIV NAT+: 0/19196 |
文献31 |
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上海莱士血制品有限公司 |
匹基HBV/HCV/HIV-1 荧光PCR核酸检测试剂 |
48人份混合，26000g离心浓缩，Roche核酸提取柱，荧光PCR |
HBV NAT+: 1/1401718 (1/140万); HCV NAT+: 31/1401718 ( 1/4.5万) ; HIV NAT+: 3/1250007 (1/41.7万) |
文献32 |
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中国药品生物制品检定所 |
Chiron Procleix HCV/HIV-1 Assay |
16人份混合，TMA技术；化学发光检测 |
HCV NAT+ : 1/10032; HIV NAT+: 0/10032 |
个人交流（检定所，白坚石博士，2005年1月） |
3.3.2 我国核酸筛查技术应用工作小结：
1）NAT检出率：有限的研究数据表明，我国献血者血液NAT检出 率
HCV NAT+ 检出率结果差异很大， 从1/365（国产试剂,电泳）～1/4.0万～0/10.4不等； HIV NAT+检出率 < 0/10.4万；HBV NAT+为 1/946（anti-HBc+ 献血者中) ～1/2088。我国原料浆NAT检出率：HCV NAT+: 1/1.0万～1/4.5万; HIV NAT+： 1/41.7万；HBV NAT+： 1/140万（48人份混合）。
2）必须重视核酸检测的质量控制体系：
注重避免交叉污染：
n 检测方法：传统的电泳检测为开放式，不适合；
n 严格的核酸检测实验室设置和管理。
注重试剂质量：为适应血液混样检测对灵敏度的要求，一些国产血筛试
剂在临床诊断试剂的基础上已做样品处理的改良，灵敏度（如匹基）在考察期间不错。但仍有待完善，表现在：
n 灵敏度、重复性、特异性：进口NAT血筛试剂质量稳定，各批质量波动小；国产试剂批间差异问题；特异性问题。
n 内标：进口试剂每个检测管均有内标，保证阴性结果的可靠性；国产试剂由于尚无法解决加入内标后灵敏度降低的问题，未加内标，因此存在假阴性问题。
n 自动化：进口试剂已有配套的检测系统和软件，便于大规模筛查；国产试剂尚在起步阶段，尚不能实现自动化，没有配套软件。
标本留样和处理：也是核酸检测质量控制体系中的重要环节，否则在检测之前病毒核酸已降解，造成假阴性检测结果。根据我们的研究结果，用于NAT检测的标本应用无菌留样管采集。
4. 血液核酸筛查发展趋势
4.1 NAT检测先从原料浆开始实施，再在献血者中实施:
NAT血液筛检方法总是从血浆制品的原料浆的筛检开始的,积累了充分的经验后,才逐步应用到血站的采供血系统。例如, 日本从97年11月起在原料浆中进行NAT筛检，1999年7月在东京都试用于献血者中［33]；欧洲医疗产品规范委员会(CPMP)规定从1999年7月起所有的血浆制品的原料、中试产品和最终产品都应进行HCVPCR检测,当时NAT只在少数血站进行评估,而大部分血站供血系统至今仍未进行NAT筛检; 美国早在1994年FDA就曾提出血浆蛋白生产的原料浆必须进行NAT筛检,而血站系统则从1999年才开始全面进行NAT的可行性评估[34]。
4.2自动化，集中化检测
以地域为单位建立几个大型的集中式的NAT血筛中心,既便于质量管理,又能节省检测成本。例如,全日本只设3家NAT检测中心,分区域对77家血液中心的标本进行HCV、HBV、HIV核酸检测和分析[35]。又如美国红十字会(ARC)在全美成立了3个NAT检测中心,每天将所有ARC血站采集的血液集中到这3个检测中心进行NAT检测,据测算,尽管血液标本的冷链运输消耗一部分费用,但集中检测的成本仍低于各个血站单独检测。我国香港地区将血液标本送到澳大利亚进行NAT检测也是这个道理。目前,欧洲各国的血站正在进行或已经完成整合,也正是顺应了集中化管理的潮流。
4.3 混合样本数逐渐减少
为降低成本,在保证灵敏度的前提下,NAT往往将一定数量的血液标本混合起来检测。NAT检测最初在欧洲普遍流行96人份样本混合检测,随后逐渐更换成48人份,直至目前的24人份混合。TMA刚开始在美国ARC进行评估时,将128份血液标本混合起来检测,随后改成16人份混合[34]。日本1999年7月起用于献血者筛查，2000年2月起由原来的500份混合检测改为50份混合检测［33］；新加坡从一开始就使用单人份血液标本进行NAT检测。这样更改的原因一是可以防止低拷贝的病毒阳性血液的漏检,二是混合样品增多,一旦发现阳性检测结果,进一步拆分混合样品,最终找到阳性血液标本的工作变得复杂耗时,有时还会影响正常的血液供应。
4.4 应考虑考虑成本－效益比
NAT对提高血液安全确实有帮助，从各国公布的NAT检出的阳性标本资料总结中可以看出,尽管世界发达国家的血液安全水平已经大幅度提高,但是由于EIA“窗口期”所致的漏检概率仍然有几百万分之一、几十万分之一甚至几万分之一,虽然从经济学角度考虑,为了保障每年如此少数几个人的安全而投入大量的人、财、物进行NAT血液筛检,不太经济,然而对于受血者来说,一旦输入感染病毒的血液,被感染的概率就是100%。因此大多数国家从人权角度考虑,仍然在经济允许的条件下开展NAT血液筛检；但成本-效益的问题也是各国家所关心的［36-39］。
4.5 一些国家已在考虑加做HBV NAT
Chiron 已开发Ultrio，可同时检测三项，初步临床试验数据表明，HBV NAT的检出率较高：在新西兰：检出HBV NAT+： 1/1991，单人份检测；新加坡： 1/6000，单人份检测。而在国内，尽管由于混合检测使HBVNAT的窗口期加长，HBV NAT+检出率仍比较高，为1/946（anti-HBc+ 献血者中) ～1/2088［25,29］。 因此，如果在国内开展NAT临床服务工作，应考虑加做HBV NAT。
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